| 中文摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-36页 |
| 1.1 拟南芥NO_3~--转运基因家族与作用 | 第16-26页 |
| 1.1.1NRT1家族NO_3~--转运蛋白 | 第16-17页 |
| 1.1.2 NRT2家族NO_3~--转运蛋白 | 第17页 |
| 1.1.3 阴离子通道CLC家族 | 第17-18页 |
| 1.1.4 SLAC/SLAH家族 | 第18页 |
| 1.1.5 NRT家族介导的吸收NO_3~--的途径 | 第18-19页 |
| 1.1.6 NO_3~--从植物体内流出 | 第19-20页 |
| 1.1.7 NO_3~--从根部到地上部运输 | 第20-21页 |
| 1.1.8 NO_3~--在营养器官间的分配 | 第21-22页 |
| 1.1.9 液泡膜上的NO_3~--转运体 | 第22-23页 |
| 1.1.10 保卫细胞中的NO_3~-- | 第23页 |
| 1.1.11 NO_3~--在种子中的转运 | 第23-24页 |
| 1.1.12 NO_3~--转运-感受器CHL1的生理作用 | 第24-25页 |
| 1.1.13 NRT2.1 的生理作用 | 第25-26页 |
| 1.2 拟南芥NO_3~--调控基因鉴定 | 第26-32页 |
| 1.2.1 拟南芥NO_3~--响应基因 | 第26页 |
| 1.2.2 第一个鉴定的NO_3~--信号途径转录因子ANR1 | 第26-27页 |
| 1.2.3 关键的NO_3~--调控基因NLP7 | 第27页 |
| 1.2.4 LBD37/38/39 功能鉴定 | 第27页 |
| 1.2.5 鉴定NO_3~--响应顺式作用元件 | 第27-28页 |
| 1.2.6 酵母单杂交筛选TCP20 | 第28页 |
| 1.2.7 系统生物学方法鉴定NO_3~--调控基因SPL9 | 第28-29页 |
| 1.2.8 系统生物学方法鉴定TGA1和TGA4 | 第29页 |
| 1.2.9 mi R393/AFB3 | 第29-30页 |
| 1.2.10 全基因组范围内筛选NO_3~--调控基因 | 第30-32页 |
| 1.3 正向遗传学方法筛选NO_3~--调控基因 | 第32-35页 |
| 1.3.1 正向遗传学筛选系统 | 第32-33页 |
| 1.3.2 CPSF30参与NO_3~--调控途径 | 第33-34页 |
| 1.3.3 拟南芥FIP1基因的作用 | 第34-35页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第35-36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第36-40页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第36页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第36页 |
| 2.1.3 酶与试剂 | 第36-39页 |
| 2.1.3.1 酶和药品 | 第36页 |
| 2.1.3.2 试剂 | 第36-37页 |
| 2.1.3.3 各种缓冲液及培养基配方 | 第37-39页 |
| 2.1.4 仪器与设备 | 第39-40页 |
| 2.1.5 引物 | 第40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-54页 |
| 2.2.1 拟南芥的生长及植物材料准备 | 第40-44页 |
| 2.2.1.1 种子的播种 | 第40页 |
| 2.2.1.2 植株的生长 | 第40-41页 |
| 2.2.1.3 种子的收集 | 第41页 |
| 2.2.1.4 种子的消毒处理 | 第41页 |
| 2.2.1.5 培养基的配制 | 第41-42页 |
| 2.2.1.6 材料的点播 | 第42页 |
| 2.2.1.7 材料的培养 | 第42页 |
| 2.2.1.8 六孔板培养法 | 第42页 |
| 2.2.1.9 Magenta Box培养法 | 第42-43页 |
| 2.2.1.10 拟南芥的杂交 | 第43页 |
| 2.2.1.11 拟南芥基因组的提取 | 第43-44页 |
| 2.2.1.12 PCR扩增 | 第44页 |
| 2.2.2 突变体的硝态氮含量测定 | 第44-45页 |
| 2.2.2.1 标准曲线的制作 | 第44-45页 |
| 2.2.2.2 材料的准备 | 第45页 |
| 2.2.2.3 硝态氮含量的测定 | 第45页 |
| 2.2.3 构建转基因植株表达载体 | 第45-51页 |
| 2.2.3.1 植物总RNA的提取（试剂盒法） | 第45-46页 |
| 2.2.3.2 反转录 | 第46-47页 |
| 2.2.3.3 Phusion PCR扩增 | 第47页 |
| 2.2.3.4 PCR产物回收（试剂盒法） | 第47-48页 |
| 2.2.3.5 TOPO连接反应 | 第48页 |
| 2.2.3.6 大肠杆菌感受态制备 | 第48-49页 |
| 2.2.3.7 大肠杆菌感受态细胞转化及鉴定 | 第49页 |
| 2.2.3.8 质粒提取 | 第49-50页 |
| 2.2.3.9 DNA序列测定 | 第50页 |
| 2.2.3.10 LR反应 | 第50页 |
| 2.2.3.11 质粒DNA的酶切鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的拟南芥遗传转化 | 第51-52页 |
| 2.2.4.1 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备与转化 | 第51-52页 |
| 2.2.4.2 拟南芥的转化 | 第52页 |
| 2.2.5 q RT-PCR | 第52-53页 |
| 2.2.5.1 引物设计及合成 | 第52页 |
| 2.2.5.2 反应条件及结果分析 | 第52-53页 |
| 2.2.6 GUS染色分析 | 第53页 |
| 2.2.7 酵母双杂交 | 第53页 |
| 2.2.8 数据统计 | 第53-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-71页 |
| 3.1 FIP1参与NO_3~--信号调控过程 | 第54-59页 |
| 3.1.1 FIP1基因结构 | 第54-55页 |
| 3.1.2 fip1突变体的分离与表型 | 第55-56页 |
| 3.1.3 FIP1和CPSF30互作关系 | 第56页 |
| 3.1.4 FIP1是NO_3~--调控基因 | 第56-57页 |
| 3.1.5 FIP1的表达不受NO_3~--诱导 | 第57-58页 |
| 3.1.6 FIP1表达模式研究 | 第58-59页 |
| 3.2 FIP1对NO_3~--吸收和分配的影响 | 第59-61页 |
| 3.2.1 FIP1对全苗NO_3~--含量的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.2 FIP1对地上部和根部NO_3~--转运基因表达量的影响 | 第60页 |
| 3.2.3 FIP1对地上部和根部NO_3~--同化基因表达量的影响 | 第60-61页 |
| 3.3 FIP1抑制了NO_3~--调控基因CIPK8、CIPK23、ANR1的表达 | 第61-63页 |
| 3.3.1 NO_3~--调控基因突变体中FIP1基因的表达 | 第61-62页 |
| 3.3.2 fip1突变体中NO_3~--调控基因的表达量变化 | 第62-63页 |
| 3.4 FIP1和CIPK23双突变对拟南芥生长表型的影响 | 第63-67页 |
| 3.4.1 fip1cipk23双突变体NO_3~--含量测定 | 第63-64页 |
| 3.4.2 fip1cipk23双突变体生长表型测定 | 第64-67页 |
| 3.5 FIP1影响初级NO_3~--响应过程的机理 | 第67-68页 |
| 3.5.1 fip1cpsf30和fip1nlp7双突变体荧光的变化 | 第67页 |
| 3.5.2 FIP1与NRT1.1 共同调控CIPK8、CIPK23和ANR1的关系 | 第67-68页 |
| 3.6 FIP1对拟南芥侧根发育的影响 | 第68-71页 |
| 3.6.1 FIP1对根密度的影响 | 第68页 |
| 3.6.2 FIP1对侧根发育相关基因表达的影响 | 第68-69页 |
| 3.6.3 FIP1在不同C/N比培养基中对侧根发育的影响 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-75页 |
| 5 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-89页 |
| 致谢 | 第89页 |
