缩略语表 | 第5-9页 |
中文摘要 | 第9-12页 |
英文摘要 | 第12-15页 |
前言 | 第16-17页 |
文献回顾 | 第17-36页 |
第一部分 长链非编码RNA芯片筛选及UCA1的表达验证 | 第36-47页 |
引言 | 第36页 |
1 材料 | 第36-37页 |
1.1 细胞系 | 第36-37页 |
1.2 主要试剂 | 第37页 |
1.3 主要仪器 | 第37页 |
2 方法 | 第37-40页 |
2.1 细胞培养 | 第37-38页 |
2.2 Trizol法提取细胞总RNA | 第38页 |
2.3 q RT-PCR验证lnc RNA的表达 | 第38-40页 |
3 结果 | 第40-45页 |
4 讨论 | 第45-47页 |
第二部分 Lnc RNA UCA1对胃癌多药耐药的调节作用 | 第47-57页 |
引言 | 第47页 |
1 材料 | 第47-49页 |
1.1 细胞系 | 第47页 |
1.2 主要试剂 | 第47-49页 |
1.3 主要仪器 | 第49页 |
2 方法 | 第49-51页 |
2.1 细胞培养 | 第49页 |
2.2 X-treme GENE转染试剂转染si RNA或质粒 | 第49-50页 |
2.3 慢病毒稳转细胞系的构建 | 第50页 |
2.4 q RT-PCR检测UCA1的表达 | 第50页 |
2.5 MTT法检测细胞体外药物敏感性 | 第50页 |
2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第50-51页 |
2.7 裸鼠皮下移植瘤模型观察肿瘤的体内药物敏感性 | 第51页 |
3 结果 | 第51-56页 |
3.1 稳定转染细胞系的建立 | 第51-52页 |
3.2 UCA1对胃癌细胞耐药性的影响 | 第52-53页 |
3.3 UCA1对胃癌细胞凋亡的调节 | 第53-55页 |
3.4 体内实验验证UCA1对胃癌细胞耐药的影响 | 第55-56页 |
4 讨论 | 第56-57页 |
第三部分 UCA1作为ce RNA促进胃癌耐药的机制研究 | 第57-76页 |
引言 | 第57页 |
1 材料 | 第57-59页 |
1.1 细胞系 | 第57页 |
1.2 主要试剂 | 第57-59页 |
1.3 主要仪器 | 第59页 |
2 方法 | 第59-65页 |
2.1 原位杂交检测胃癌细胞内UCA1表达 | 第59-60页 |
2.2 胞核胞浆RNA分离 | 第60页 |
2.3 细胞mi RNA提取与q RT-PCR检测mi RNA表达 | 第60-62页 |
2.4 Western blot 检测蛋白表达 | 第62页 |
2.5 RNA结合蛋白免疫共沉淀(RIP) | 第62-64页 |
2.6 双荧光素酶报告基因实验 | 第64-65页 |
3 结果 | 第65-73页 |
3.1 UCA1的细胞内定位研究 | 第65-67页 |
3.2 UCA1与mi RNA、蛋白相互作用的生物信息学预测 | 第67-68页 |
3.3 UCA1与AGO2、let-7e相互作用的的实验验证 | 第68-70页 |
3.4 let-7 及HMGA2的表达功能验证和let-7 下游靶分子验证 | 第70-72页 |
3.5 UCA1与HMGA2的相关分析及UCA1对HMGA2的表达调控验证 | 第72-73页 |
4 讨论 | 第73-76页 |
小结 | 第76-77页 |
参考文献 | 第77-90页 |
附录 | 第90-91页 |
个人简历和研究成果 | 第91-92页 |
致谢 | 第92-93页 |