| 主要英文缩略语索引 | 第6-8页 |
| 中文摘要 | 第8-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 引言 | 第14-18页 |
| 材料和方法 | 第18-32页 |
| 1 材料 | 第18-21页 |
| 1.1 细胞株 | 第18页 |
| 1.2 质粒与菌株 | 第18页 |
| 1.3 主要试剂 | 第18-20页 |
| 1.4 仪器设备 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-32页 |
| 2.1 主要试剂配制 | 第21-22页 |
| 2.2 Chk2 真核及原核表达载体构建 | 第22-26页 |
| 2.3 细胞转染和筛选稳定过表达或沉默的 HeLa 细胞 | 第26-27页 |
| 2.4 细胞培养与细胞照射 | 第27页 |
| 2.5 Quantitative Real-time PCR 检测构建的 HeLa 细胞系中Chk2 表达 | 第27-28页 |
| 2.6 细胞同步化于有丝分裂期 | 第28页 |
| 2.7 细胞增殖实验 | 第28页 |
| 2.8 MTT 法检测细胞活存率 | 第28页 |
| 2.9 BCA 法定量蛋白 | 第28-29页 |
| 2.10 Western blotting 检测蛋白水平表达 | 第29页 |
| 2.11 γH2AX 免疫荧光共聚焦显微镜观察法 | 第29页 |
| 2.12 流式细胞仪检测细胞周期 | 第29-30页 |
| 2.13 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第30页 |
| 2.14 免疫共沉淀 | 第30页 |
| 2.15 GST 融合蛋白沉降技术检测蛋白质-蛋白质相互作用 | 第30-31页 |
| 2.16 统计学分析 | 第31-32页 |
| 结果 | 第32-58页 |
| 1 细胞有丝分裂进程相关的 H2AX 磷酸化 | 第32-39页 |
| 1.1 γH2AX 与多种 DNA 损伤修复蛋白有亚细胞共定位 | 第32-33页 |
| 1.2 同步化细胞进入 M 期后 H2AX 的磷酸化水平提高 | 第33-35页 |
| 1.3 细胞从 M 期阻滞释放后 H2AX 磷酸化水平回降 | 第35-36页 |
| 1.4 不同剂量γ射线照射细胞后γH2AX 的产生和量变时间 | 第36-39页 |
| 2 Chk2 调控细胞有丝分裂进程 | 第39-51页 |
| 2.1 Chk2 原核表达载体的构建 | 第39-40页 |
| 2.2 Chk2 真核表达载体的构建 | 第40-41页 |
| 2.3 Chk2 野生型和突变型过表达 HeLa 细胞系的建立 | 第41-43页 |
| 2.4 Chk2 过表达野生型和突变型对细胞周期进程的影响 | 第43-44页 |
| 2.5 Chk2 过表达提高了电离辐射引起的细胞周期 G2/M 期阻滞 | 第44-45页 |
| 2.6 Chk2 沉默 HeLa 细胞系的建立 | 第45-46页 |
| 2.7 Chk2 沉默细胞增殖速度加快 | 第46-47页 |
| 2.8 Chk2 沉默加快了细胞周期进程 | 第47-48页 |
| 2.9 Chk2 沉默降低了电离辐射引起的细胞周期 G2/M 期阻 | 第48-49页 |
| 2.10 Chk2 沉默导致电离辐射诱导的细胞凋亡率降低 | 第49-50页 |
| 2.11 Chk2 沉默导致电离辐射诱导的 p53 和 pig3 水平降低 | 第50页 |
| 2.12 Chk2 沉默导致细胞对微管损伤药物紫杉醇的敏感性降低 | 第50-51页 |
| 3 DNA-PKcs 调控细胞有丝分裂进程及 Chk2 和 H2AX 的磷酸化 | 第51-58页 |
| 3.1 有丝分裂期 Chk2 Thr68 位点的磷酸化和 H2AX Ser139 位点的磷酸化主要受 DNA-PKcs的调控 | 第51-55页 |
| 3.2 DNA-PKcs 沉默或活性抑制导致细胞有丝分裂异常比率增加 | 第55-58页 |
| 讨论 | 第58-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 附录一 引物序列表 | 第69-70页 |
| 附录二 综述 | 第70-80页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
