| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 材料与方法 | 第11-33页 |
| 1 实验材料 | 第11-18页 |
| 1.1 实验动物、质粒和细胞 | 第11页 |
| 1.2 实验仪器设备 | 第11-12页 |
| 1.3 试剂与相关溶液配制 | 第12-18页 |
| 1.3.1 化学试剂 | 第12-13页 |
| 1.3.2 石蜡切片及 HE 染色试剂 | 第13页 |
| 1.3.3 免疫组化试剂及相关溶液配制 | 第13-14页 |
| 1.3.4 质粒提取试剂及相关溶液配制 | 第14页 |
| 1.3.5 细胞培养及转染相关试剂及溶液配制 | 第14-15页 |
| 1.3.6 组织 RNA 提取、RT-PCR 试剂 | 第15-16页 |
| 1.3.7 Western blot 法相关试剂及相关溶液配制 | 第16-18页 |
| 2 实验方法 | 第18-33页 |
| 2.1 感受态细胞的制备与转化 | 第18-19页 |
| 2.1.1 E.coli 感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| 2.1.2 转化 | 第19页 |
| 2.2 质粒的提取 | 第19-20页 |
| 2.3 SD 新生大鼠心肌细胞的提取 | 第20页 |
| 2.3.1 胰酶顺序消化法： | 第20页 |
| 2.3.2 差速贴壁法和 Brdu 法纯化心肌细胞 | 第20页 |
| 2.4 | 第20-23页 |
| 2.4.1 细胞转染原理 | 第20-21页 |
| 2.4.2 转染实验步骤： | 第21-22页 |
| 2.4.3 荧光素酶(Luciferase)检测 | 第22-23页 |
| 2.5 RT-PCR 检测心肌肥厚的分化 marker 的表达情况 | 第23-25页 |
| 2.5.1 RT-PCR 技术原理 | 第23页 |
| 2.5.2 细胞的加药及转染处理 | 第23-24页 |
| 2.5.3 总 RNA 的提取 | 第24页 |
| 2.5.4 逆转录过程 | 第24页 |
| 2.5.6 PCR 体系: | 第24-25页 |
| 2.5.7 PCR 条件： | 第25页 |
| 2.6 Western Blot | 第25-27页 |
| 2.6.1 Western Blot 原理 | 第25页 |
| 2.6.2 配胶 | 第25-26页 |
| 2.6.3 样品处理 | 第26页 |
| 2.6.4 电泳 | 第26-27页 |
| 2.6.5 转膜 | 第27页 |
| 2.6.6 封闭及杂交 | 第27页 |
| 2.6.7 发光鉴定 | 第27页 |
| 2.7 大鼠心肌肥厚模型的建立及相关内源基因表达的分析 | 第27-33页 |
| 2.7.1 腹主动脉狭窄实验动物模型制作 | 第28页 |
| 2.7.2 心脏实际重量的测定及 HE、masson 染色 | 第28-31页 |
| 2.7.3 大鼠心肌组织相关基因的半定量 RT-PCR | 第31-32页 |
| 2.7.4 大鼠心肌组织相关基因的 western blotting 检测 | 第32-33页 |
| 第二章 结果 | 第33-47页 |
| 1 在 COS-7 细胞中，组蛋白乙酰化酶 p300 对 myocardin/MRTF-A 转录活性的调节 | 第33-41页 |
| 1.2 在原代心肌细胞中，p300 对 myocardin/MRTF-A 转录活性的调节 | 第35-41页 |
| 1.2.1 SD 大鼠心肌细胞分离纯化及鉴定 | 第35-36页 |
| 1.2.2 在体外实验中，p300 和 myocardin 协同驱动心肌肥厚标志基因启动子 | 第36-38页 |
| 1.2.3 去乙酰化酶 HDAC5 对 p300-myocardin/MRTF-A 的抑制作用 | 第38页 |
| 1.2.4 p300 协同 myocardin/MRTF-A 激活心肌细胞内源性肥厚标志基因的表达 | 第38-41页 |
| 2 大鼠心肌肥厚模型的建立及内源基因表达变化相关性的分析 | 第41-47页 |
| 2.1 肥厚模型形态学指标的测定 | 第41-42页 |
| 2.2 内源性特异调控因子与肥厚分化、增殖标志蛋白表达变化的免疫组化分析 | 第42-45页 |
| 2.3 利用 RT-PCR 技术分析模型鼠内源性 myocardin/MRTF-A 及心肌肥厚标志基因转录水平变化 | 第45-47页 |
| 第三章 讨论 | 第47-49页 |
| 第四章 结论 | 第49-50页 |
| 展望 | 第50-51页 |
| 综述 | 第51-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 在读期间的科研活动与成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
