| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 前言 | 第9-16页 |
| 1.1 副猪嗜血杆菌的病原学 | 第9-10页 |
| 1.2 副猪嗜血杆菌病病的流行病学及危害 | 第10-11页 |
| 1.2.1 副猪嗜血杆菌病的流行病学 | 第10页 |
| 1.2.2 副猪嗜血杆菌病的危害 | 第10-11页 |
| 1.3 副猪嗜血杆菌的分型 | 第11-12页 |
| 1.3.1 血清型分型 | 第11页 |
| 1.3.2 基因分型 | 第11-12页 |
| 1.4 副猪嗜血杆菌的主要毒力因子 | 第12-13页 |
| 1.5 副猪嗜血杆菌的诊断方法 | 第13-14页 |
| 1.5.1 病原学诊断 | 第13-14页 |
| 1.5.2 血清学诊断 | 第14页 |
| 1.6 副猪嗜血杆菌病的防制 | 第14-15页 |
| 1.7 双向电泳技术的发展及应用 | 第15页 |
| 1.8 本研究的目的及意义 | 第15-16页 |
| 第二章 2.1副猪嗜血杆菌外膜蛋白双向电泳方法建立 | 第16-31页 |
| 2.1 材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌种 | 第16页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第16页 |
| 2.1.4 主要溶液及配制 | 第16-18页 |
| 2.2 方法 | 第18-21页 |
| 2.2.1 副猪嗜血杆菌HS0165外膜蛋白的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 副猪嗜血杆菌HS0165外膜蛋白双向电泳方法建立 | 第19-20页 |
| 2.2.3 副猪嗜血杆菌Western blotting分析 | 第20-21页 |
| 2.2.4 副猪嗜血杆菌外膜蛋白质谱分析 | 第21页 |
| 2.3 结果 | 第21-29页 |
| 2.3.1 外膜蛋白样品裂解液配方的优化 | 第21-22页 |
| 2.3.2 外膜蛋白上样量的优化 | 第22-24页 |
| 2.3.3 等电聚焦时间的优化 | 第24-26页 |
| 2.3.4 双向电泳四次重复测试结果 | 第26页 |
| 2.3.5 Western blotting分析结果 | 第26-27页 |
| 2.3.6 质谱分析结果 | 第27-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29页 |
| 2.5 小结 | 第29-31页 |
| 第三章 副猪嗜血杆菌HS1065外膜蛋白P2、PLP4、D15、NQRA、RPSB的原核表达及免疫原性分析 | 第31-50页 |
| 3.1 材料 | 第31-33页 |
| 3.1.1 菌株、质粒 | 第31页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第31页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第31页 |
| 3.1.4 主要溶液及培养基的配制 | 第31-32页 |
| 3.1.5 实验动物 | 第32-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-41页 |
| 3.3 结果 | 第41-48页 |
| 3.3.1 P2、nqrA、PIp4、rpsB、D15基因的克隆与重组质粒的构建及双酶切鉴定 | 第41页 |
| 3.3.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第41-43页 |
| 3.3.3 重组蛋白的westenr blotting分析 | 第43-44页 |
| 3.3.4 免疫小鼠血清抗体变化情况 | 第44-45页 |
| 3.3.5 半数致死量(LD50)的测定 | 第45-46页 |
| 3.3.6 攻毒试验 | 第46-47页 |
| 3.3.7 包被蛋白的初选 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48页 |
| 3.5 小结 | 第48-50页 |
| 第四章 副猪嗜血杆菌外膜蛋白ELISA方法建立 | 第50-58页 |
| 4.1 材料 | 第50页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第50页 |
| 4.1.2 菌株与血清 | 第50页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第50页 |
| 4.2 方法 | 第50-53页 |
| 4.2.1 包被抗原-重组蛋白的制备 | 第50页 |
| 4.2.2 ELISA方法的建立及条件优化 | 第50页 |
| 4.2.3 ELISA操作程序 | 第50-51页 |
| 4.2.4 抗原包被的最佳浓度与一抗最佳稀释度的确定 | 第51-52页 |
| 4.2.5 最适封闭液的确定 | 第52页 |
| 4.2.6 被检血清作用时间的优化 | 第52页 |
| 4.2.7 辣根过氧化物酶标记的酶标二抗作用时间的优化 | 第52页 |
| 4.2.8 底物显色时间的优化 | 第52页 |
| 4.2.9 cut-off值的确定 | 第52-53页 |
| 4.2.10 间接ELISA方法的特异性(交叉反应)测试 | 第53页 |
| 4.2.11 间接ELISA方法的敏感性试验 | 第53页 |
| 4.2.12 临床样品试验 | 第53页 |
| 4.3 结果 | 第53-56页 |
| 4.3.1 抗原包被浓度与被检血清稀释度的确定 | 第53-54页 |
| 4.3.2 最佳封闭液与最佳封闭时间的确定 | 第54页 |
| 4.3.3 一抗最佳作用时间的优化 | 第54页 |
| 4.3.4 酶标二抗(辣根标记的山羊抗猪IgG)工作时间的确定 | 第54-55页 |
| 4.3.5 TMB底物显色时间的确定 | 第55页 |
| 4.3.6 间接ELISA临界值(Cut off值)的确定 | 第55页 |
| 4.3.7 间接ELISA方法的特异性测试 | 第55-56页 |
| 4.3.8 间接ELISA方法的敏感性测试 | 第56页 |
| 4.3.9 临床血清试验结果 | 第56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-57页 |
| 4.5 小结 | 第57-58页 |
| 第五章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
