| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 中英文缩略词表 | 第8-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 1 实验材料 | 第12-15页 |
| 1.1 实验试剂 | 第12-13页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第13-14页 |
| 1.3 实验溶剂 | 第14-15页 |
| 2 实验方法 | 第15-26页 |
| 2.1 细胞培养及表皮生长因子处理 | 第15-17页 |
| 2.1.1 细胞的复苏 | 第15页 |
| 2.1.2 细胞的培养和传代 | 第15-16页 |
| 2.1.3 细胞的冻存 | 第16页 |
| 2.1.4 表皮生长因子处理处理及细胞上清的收集 | 第16-17页 |
| 2.2 超高速离心法分离外泌体 | 第17页 |
| 2.3 外泌体的鉴定 | 第17-22页 |
| 2.3.1 透射电子显微镜观察外泌体的形态 | 第17-18页 |
| 2.3.2 纳米示踪分析观察外泌体粒径分布及颗粒浓度 | 第18页 |
| 2.3.3 Western印记检测外泌体内源性蛋白表达水平 | 第18-22页 |
| 2.3.3.1 细胞总蛋白的提取 | 第18-19页 |
| 2.3.3.2 外泌体蛋白的提取 | 第19页 |
| 2.3.3.3 蛋白浓度的测定 | 第19-21页 |
| 2.3.3.4 Western blot蛋白印记检测蛋白表达水平 | 第21-22页 |
| 2.4 荧光共聚焦显微镜观察肺腺癌细胞摄取外泌体 | 第22-23页 |
| 2.4.1 外泌体的染色 | 第22-23页 |
| 2.4.2 荧光共聚焦显微镜上样制片 | 第23页 |
| 2.5 细胞学实验 | 第23-25页 |
| 2.5.1 细胞增殖实验 | 第23-24页 |
| 2.5.2 细胞迁移实验 | 第24-25页 |
| 2.5.3 细胞侵袭实验 | 第25页 |
| 2.6 统计学分析方法 | 第25-26页 |
| 3 实验结果 | 第26-40页 |
| 3.1 EGF对外泌体基本特征的影响 | 第26-36页 |
| 3.1.1 EGF对肺腺癌H322细胞的影响 | 第26-30页 |
| 3.1.1.1 EGF处理H322细胞形态的变化 | 第26-27页 |
| 3.1.1.2 EGF处理后H322细胞增殖、侵袭、转移能力明显升高 | 第27-30页 |
| 3.1.2 EGF刺激对外泌体形态和颗粒直径的影响 | 第30-32页 |
| 3.1.3 纳米颗粒示踪检测外泌体粒径分布与颗粒浓度 | 第32-34页 |
| 3.1.4 Western-blot蛋白印记检测外泌体特异性蛋白的表达 | 第34-35页 |
| 3.1.5 EGF处理对H322细胞外泌体分泌量的影响 | 第35-36页 |
| 3.2 EGF对外泌体生物学功能的影响 | 第36-40页 |
| 3.2.1 荧光共聚焦显微镜观察肺腺癌H322细胞摄取外泌体 | 第36-37页 |
| 3.2.2 EGF处理后H322细胞产生的外泌体对H322细胞增殖能力的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.3 外泌体对细胞迁移能力的影响 | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 文献综述 | 第48-69页 |
| References | 第60-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
