| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第13-26页 |
| 第一章 mGSCs的表观修饰调控研究进展 | 第13-19页 |
| 1.1 mGSCs | 第13-14页 |
| 1.1.1 mGSCs的来源 | 第13页 |
| 1.1.2 mGSCs的生物学标志与功能 | 第13-14页 |
| 1.2 干细胞表观修饰调控 | 第14-17页 |
| 1.2.1 表观修饰调控的主要方式 | 第14-17页 |
| 1.2.2 mGSCs的表观修饰调控 | 第17页 |
| 1.3 小结 | 第17-19页 |
| 第二章 Tet蛋白的研究进展 | 第19-26页 |
| 2.1 Tet蛋白的结构与作用机制 | 第19-20页 |
| 2.1.1 Tet蛋白的结构 | 第19-20页 |
| 2.1.2 Tet蛋白的DNA去甲基化机制 | 第20页 |
| 2.2 Tet蛋白氧化产物的基因组分布与调控功能 | 第20-21页 |
| 2.3 Tet蛋白的调控途径 | 第21-22页 |
| 2.3.1 维生素C | 第21页 |
| 2.3.2 α-酮戊二酸（α-KG）与糖基化 | 第21-22页 |
| 2.3.3 蛋白伴侣 | 第22页 |
| 2.4 Tet的生物学功能 | 第22-23页 |
| 2.4.1 Tet蛋白与发育 | 第22-23页 |
| 2.4.2 Tet蛋白与重编程 | 第23页 |
| 2.5 Tet蛋白与精子发生 | 第23-25页 |
| 2.5.1 精子发生过程中的表观遗传修饰 | 第23-24页 |
| 2.5.2 Tet1在精子发生过程中的表观修饰调控 | 第24-25页 |
| 2.6 小结 | 第25-26页 |
| 试验部分 | 第26-85页 |
| 第三章 Tet1在奶山羊mGSCs的表达模式和组蛋白甲基化 | 第26-40页 |
| 3.1 材料和仪器 | 第26-27页 |
| 3.1.1 动物和主要试剂 | 第26页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第26-27页 |
| 3.1.3 主要溶液的配制 | 第27页 |
| 3.2 方法 | 第27-31页 |
| 3.2.1 总RNA的提取及QRT-PCR检测Tet1的表达 | 第27-28页 |
| 3.2.2 组织切片的制备 | 第28页 |
| 3.2.3 组织切片的免疫组化分析 | 第28-29页 |
| 3.2.4 组织切片的免疫荧光分析 | 第29页 |
| 3.2.5 细胞的免疫荧光染色分析 | 第29页 |
| 3.2.6 组织切片与细胞的 5hmC染色分析 | 第29-30页 |
| 3.2.7 奶山羊mGSCs的原代组织分离与培养 | 第30页 |
| 3.2.8 western blot分析 | 第30-31页 |
| 3.2.9 统计分析 | 第31页 |
| 3.3 结果 | 第31-38页 |
| 3.3.1 Tet1在奶山羊睾丸组织中的表达水平与定位分析 | 第31-32页 |
| 3.3.25hmC在奶山羊睾丸组织中的含量与定位分析 | 第32-33页 |
| 3.3.3 奶山羊精子发生过程中组蛋白甲基化模式分析 | 第33-35页 |
| 3.3.4 体外培养的mGSCs中Tet1与组蛋白甲基化的检测分析 | 第35-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-39页 |
| 3.5 小结 | 第39-40页 |
| 第四章 Tet1对奶山羊mGSCs的体外修饰调控 | 第40-56页 |
| 4.1 材料和仪器 | 第40-41页 |
| 4.1.1 动物和主要试剂 | 第40页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第40-41页 |
| 4.1.3 主要溶液的配制 | 第41页 |
| 4.2 方法 | 第41-43页 |
| 4.2.1 Tet1基因的物种间同源性分析 | 第41页 |
| 4.2.2 重构载体的鉴定与扩增 | 第41页 |
| 4.2.3 细胞转染与阳性细胞克隆的筛选 | 第41-42页 |
| 4.2.4 CCK8检测分析 | 第42页 |
| 4.2.5 流式细胞术分析 | 第42页 |
| 4.2.6 5-Bromo2deoxyuridine (BrdU)分析 | 第42-43页 |
| 4.2.7 群体倍增时间分析（Population doubling time, PDT) | 第43页 |
| 4.2.8 生长曲线测定分析 | 第43页 |
| 4.2.9 其他相关的方法分析 | 第43页 |
| 4.2.10 统计分析 | 第43页 |
| 4.3 结果 | 第43-53页 |
| 4.3.1 Tet1基因的遗传同源性分析 | 第43-44页 |
| 4.3.2 Tet1过表达的mGSCs的阳性细胞的获得 | 第44-46页 |
| 4.3.3 5hmC在mGSC-mTet1细胞中的变化分析 | 第46页 |
| 4.3.4 mGSC-mTet1细胞的最佳Dox诱导浓度的确定 | 第46-48页 |
| 4.3.5 mGSC-mTet1细胞的基因表达分析 | 第48-50页 |
| 4.3.6 mGSC-mTet1细胞的增殖能力检测 | 第50页 |
| 4.3.7 mGSC-mTet1细胞的组蛋白甲基化检测 | 第50-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-55页 |
| 4.5 小结 | 第55-56页 |
| 第五章 过表达mTet1的mGSCs的体内功能验证 | 第56-69页 |
| 5.1 材料和仪器 | 第56页 |
| 5.1.1 动物和主要试剂 | 第56页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第56页 |
| 5.1.3 主要溶液的配制 | 第56页 |
| 5.2 方法 | 第56-58页 |
| 5.2.1 载体构建 | 第56-57页 |
| 5.2.2 病毒包装 | 第57-58页 |
| 5.2.3 类胚体（EBs）的制备与分化 | 第58页 |
| 5.2.4 白消安模型鼠的制备 | 第58页 |
| 5.2.5 其他相关的方法分析 | 第58页 |
| 5.2.6 统计分析 | 第58页 |
| 5.3 结果 | 第58-67页 |
| 5.3.1 Tet1重组慢病毒载体的构建与阳性细胞的获取 | 第58-60页 |
| 5.3.2 mGSC-pCDH-mTet1阳性克隆的筛选与基因的表达分析 | 第60-62页 |
| 5.3.3 mGSC-pCDH-mTet1细胞的体外分化能力检测 | 第62页 |
| 5.3.4 mGSC-pCDH-mTet1细胞的曲细精管转导检测 | 第62-63页 |
| 5.3.5 mGSC-pCDH-mTet1细胞曲细精管移植的生殖干细胞自我更新和分化特性检测 | 第63-67页 |
| 5.4 讨论 | 第67页 |
| 5.5 小结 | 第67-69页 |
| 第六章 Tet1对奶山羊mGSCs的调控机理 | 第69-85页 |
| 6.1 材料和仪器 | 第69页 |
| 6.1.1 动物和主要试剂 | 第69页 |
| 6.1.2 主要仪器 | 第69页 |
| 6.1.3 主要溶液的配制 | 第69页 |
| 6.2 方法 | 第69-73页 |
| 6.2.1 载体构建 | 第69-70页 |
| 6.2.2 基因启动子的甲基化分析 | 第70-72页 |
| 6.2.3 免疫共沉淀Co-IP分析 | 第72-73页 |
| 6.2.4 其他相关的方法分析 | 第73页 |
| 6.2.5 统计分析 | 第73页 |
| 6.3 结果 | 第73-83页 |
| 6.3.1 mTet1互相作用方式的分析 | 第73页 |
| 6.3.2 mTet1对组蛋白甲基化的影响机理 | 第73-75页 |
| 6.3.3 mTet1对增殖的影响机理 | 第75-78页 |
| 6.3.4 mTet1对组蛋白乙酰化的影响机理 | 第78-83页 |
| 6.4 讨论 | 第83-84页 |
| 6.5 小结 | 第84-85页 |
| 全文结论 | 第85-86页 |
| 创新之处和进一步研究课题 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-97页 |
| 附录 | 第97-101页 |
| 缩略词 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 作者简介 | 第103页 |
