| 中文摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略语表 | 第8-10页 |
| 1 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 结核分枝杆菌及其抗药机制 | 第10-18页 |
| 1.2 转录因子介导的分枝杆菌抗药机制 | 第18-22页 |
| 1.2.1 结核分枝杆菌中的转录因子 | 第18-20页 |
| 1.2.2 转录因子调控转运蛋白及药物外排泵的表达 | 第20-22页 |
| 1.3 课题研究的目的、意义及策略 | 第22-24页 |
| 1.3.1 本研究的目的和意义 | 第22页 |
| 1.3.2 本研究的策略 | 第22-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-29页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 供试质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.3 培养基及抗生素 | 第25-26页 |
| 2.1.4 酶、试剂及试剂盒 | 第26-28页 |
| 2.1.5 供试引物 | 第28-29页 |
| 2.1.6 其他相关试剂、缓冲液 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-42页 |
| 2.2.1 目的基因的克隆 | 第29-32页 |
| 2.2.2 目的蛋白的表达纯化 | 第32-34页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳迁移实验(EMSA) | 第34页 |
| 2.2.4 染色质免疫共沉淀 | 第34-35页 |
| 2.2.5 DNase I足迹实验(DNaseI Footprinting assay) | 第35-36页 |
| 2.2.6 β-半乳糖苷酶活性测定 | 第36-37页 |
| 2.2.7 目的基因的敲除及验证 | 第37-39页 |
| 2.2.8 生长曲线的测定 | 第39-40页 |
| 2.2.9 实时定量PCR | 第40-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-61页 |
| 3.1 Rv2642基因图谱、同源性及结构域分析 | 第42-44页 |
| 3.1.2 超表达Rv2642导致M.bovis BCG产生INH抗性 | 第43-44页 |
| 3.2 Rv2642与自身启动子特异性相互作用 | 第44-47页 |
| 3.2.1 Rv2642在体外能结合自身启动子DNA | 第44-45页 |
| 3.2.2 竞争性实验证实Rv2642与自身启动子的特异性相互作用 | 第45-46页 |
| 3.2.3 ChIP实验证实Rv2642在体内能特异性结合自身启动子 | 第46-47页 |
| 3.3 Rv2642结合长36 bp的回文序列 | 第47-50页 |
| 3.3.1 DNase Ⅰ足迹法鉴定Rv2642结合DNA的保守区域 | 第47-49页 |
| 3.3.2 反向互补序列TCAATATTGA是Rv2642结合位点 | 第49-50页 |
| 3.4 Rv2642负调控自身基因的表达 | 第50-52页 |
| 3.4.1 β-半乳糖苷酶活性实验证实Rv2642负调控自身基因的表达 | 第50-52页 |
| 3.5 实时定量PCR证实Rv2642负调控靶基因的表达 | 第52-59页 |
| 3.5.1 Rv2642同源基因敲除菌株的构建 | 第52-54页 |
| 3.5.2 敲除菌株的验证 | 第54-58页 |
| 3.5.3 实时定量PCR证实Rv2642负调控靶基因的表达 | 第58-59页 |
| 3.6 Rv2642同源基因缺失突变导致M.bovis BCG对INH敏感 | 第59-61页 |
| 4 总结与讨论 | 第61-67页 |
| 4.1 总结 | 第61页 |
| 4.2 讨论 | 第61-67页 |
| 参考文献 | 第67-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
