| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 小麦醇溶蛋白现状 | 第12-14页 |
| 1.1.1 小麦品种分类 | 第12-13页 |
| 1.1.1.1 优质强筋小麦品种划分 | 第12页 |
| 1.1.1.2 优质中筋和弱筋小麦品种划分 | 第12-13页 |
| 1.1.1.3 按照硬度和颜色对小麦品种进行分类 | 第13页 |
| 1.1.2 小麦醇溶蛋白分类 | 第13-14页 |
| 1.2 醇溶蛋白与品质关系 | 第14-16页 |
| 1.2.1 醇溶蛋白组成与面筋强度 | 第14-15页 |
| 1.2.2 醇溶蛋白组成与品质性状 | 第15-16页 |
| 1.3 氨基酸序列结构特征 | 第16-18页 |
| 1.4 基因克隆方法 | 第18-19页 |
| 1.4.1 c DNA末端快速扩增技术 | 第18页 |
| 1.4.2 电子克隆技术 | 第18-19页 |
| 1.5 表达分析 | 第19-21页 |
| 1.5.1 荧光定量PCR | 第19-20页 |
| 1.5.2 原核表达系统 | 第20页 |
| 1.5.3 蛋白质免疫印迹 | 第20-21页 |
| 第二章 醇溶蛋白基因筛选 | 第21-27页 |
| 2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第22页 |
| 2.2.1.1 准备 | 第22页 |
| 2.2.1.2 RNA提取 | 第22页 |
| 2.2.2 反转录c DNA链合成 | 第22-23页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR | 第23-25页 |
| 2.2.3.1 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.2.3.2 荧光定量PCR | 第24-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-27页 |
| 2.3.1 差异表达醇溶蛋白基因筛选 | 第25页 |
| 2.3.2 实时荧光定量PCR检测 | 第25-27页 |
| 2.3.2.1 RNA浓度测定及电泳检测 | 第25-26页 |
| 2.3.2.2 荧光定量PCR分析 | 第26-27页 |
| 第三章 Ta WG04基因克隆与表达分析 | 第27-42页 |
| 3.1 材料 | 第27-28页 |
| 3.1.1 供试小麦品种 | 第27页 |
| 3.1.2 主要试剂与仪器 | 第27-28页 |
| 3.1.3 引物设计与合成 | 第28页 |
| 3.2 方法 | 第28-35页 |
| 3.2.1 Ta WG04基因的克隆 | 第28-33页 |
| 3.2.1.1 成熟种子RNA提取 | 第29页 |
| 3.2.1.2 反转录c DNA链合成 | 第29页 |
| 3.2.1.3 全长c DNA扩增 | 第29-31页 |
| 3.2.1.4 特异性目标DNA片段的回收纯化 | 第31-32页 |
| 3.2.1.5 回收DNA片段的连接 | 第32页 |
| 3.2.1.6 连接产物的转化 | 第32页 |
| 3.2.1.7 挑取阳性单克隆 | 第32-33页 |
| 3.2.1.8 序列测定与分析 | 第33页 |
| 3.2.2 生物信息学分析 | 第33-34页 |
| 3.2.2.1 DNA提取 | 第33-34页 |
| 3.2.2.2 开放阅读框PCR扩增 | 第34页 |
| 3.2.2.3 基因克隆与序列检测 | 第34页 |
| 3.2.3 Ta WG04基因表达特性 | 第34-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-42页 |
| 3.3.1 Ta WG04基因全长c DNA序列获得 | 第35-36页 |
| 3.3.2 Ta WG04基因编码蛋白序列分析 | 第36-38页 |
| 3.3.3 Ta WG04基因系统进化分析 | 第38-40页 |
| 3.3.4 Ta WG04基因表达特性分析 | 第40-42页 |
| 3.3.4.1 Ta WG04基因在不同时期表达量差异 | 第40页 |
| 3.3.4.2 Ta WG04基因在不同器官表达量差异 | 第40-41页 |
| 3.3.4.3 Ta WG04基因在不同品种间的表达量差异 | 第41-42页 |
| 第四章 原核表达与抗体制备 | 第42-55页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第42-44页 |
| 4.1.1 材料 | 第42页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第42-44页 |
| 4.2 方法 | 第44-51页 |
| 4.2.1 原核表达载体构建 | 第44-47页 |
| 4.2.1.1 重组质粒提取 | 第44-45页 |
| 4.2.1.2 PCR扩增 | 第45页 |
| 4.2.1.3 重组质粒的酶切 | 第45-46页 |
| 4.2.1.4 沉淀回收 | 第46页 |
| 4.2.1.5 重组质粒与载体连接 | 第46页 |
| 4.2.1.6 连接产物的转化 | 第46-47页 |
| 4.2.1.7 挑取阳性单克隆 | 第47页 |
| 4.2.1.8 序列测定与分析 | 第47页 |
| 4.2.2 目的蛋白获取 | 第47-49页 |
| 4.2.2.1 IPTG诱导蛋白表达 | 第48页 |
| 4.2.2.2 电泳检测 | 第48-49页 |
| 4.2.2.3 亲和纯化蛋白 | 第49页 |
| 4.2.3 制备多克隆抗体 | 第49-50页 |
| 4.2.3.1 免疫动物 | 第49-50页 |
| 4.2.3.2 免疫反应 | 第50页 |
| 4.2.3.3 ELISA检测血清效价 | 第50页 |
| 4.2.3.4 抗血清纯化 | 第50页 |
| 4.2.4 蛋白质免疫印迹法 | 第50-51页 |
| 4.2.4.1 蛋白质提取 | 第51页 |
| 4.2.4.2 SDS-PAGE电泳 | 第51页 |
| 4.2.4.3 转膜 | 第51页 |
| 4.3 结果与分析 | 第51-55页 |
| 4.3.1 Ta WG04原核表达载体构建及重组子鉴定 | 第51-52页 |
| 4.3.2 目的基因表达产物的SDS-PAGE分析 | 第52-53页 |
| 4.3.3 多克隆抗体制备与效价检测 | 第53页 |
| 4.3.4 蛋白质免疫印迹法检测 | 第53-54页 |
| 4.3.5 多克隆抗体的检测应用 | 第54-55页 |
| 第五章 讨论 | 第55-59页 |
| 5.1 醇溶蛋白基因在强筋小麦郑麦366中表达受到抑制 | 第55页 |
| 5.2 Ta WG04基因属于γ类多基因醇溶蛋白 | 第55-56页 |
| 5.3 Ta WG04基因在胚乳中特异表达 | 第56-57页 |
| 5.4 Ta WG04基因对强筋品质具有负效应 | 第57页 |
| 5.5 醇溶蛋白基因的应用 | 第57-59页 |
| 附件1 | 第59-60页 |
| 附件2 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 个人简历 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
