| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 角膜的结构与功能 | 第13-16页 |
| 1.1 角膜结构 | 第13-15页 |
| 1.1.1 角膜上皮层 | 第13-14页 |
| 1.1.2 角膜内皮层 | 第14页 |
| 1.1.3 角膜基质层 | 第14-15页 |
| 1.2 角膜功能 | 第15-16页 |
| 1.2.1 保护功能 | 第15页 |
| 1.2.2 光的传播功能 | 第15-16页 |
| 2 角膜组织工程概述 | 第16-21页 |
| 2.1 角膜上皮层的构建 | 第17-18页 |
| 2.2 角膜基质层的构建 | 第18-19页 |
| 2.3 角膜内皮层的构建 | 第19页 |
| 2.4 种子细胞 | 第19-21页 |
| 第二章 牛胶原蛋白载体支架的制备和鉴定 | 第21-33页 |
| 1 实验仪器和材料 | 第21-24页 |
| 1.1 实验仪器 | 第21页 |
| 1.2 实验材料与试剂 | 第21-22页 |
| 1.2.1 实验材料 | 第21页 |
| 1.2.2 实验试剂 | 第21-22页 |
| 1.3 主要溶液配制 | 第22-24页 |
| 1.3.1 PBS缓冲液配制 | 第22页 |
| 1.3.2 交联剂 | 第22页 |
| 1.3.3 D-Hanks平衡盐溶液 | 第22页 |
| 1.3.4 生理盐水配制 | 第22-23页 |
| 1.3.5 伊红染液配制 | 第23页 |
| 1.3.6 0.1 M的HCl溶液 | 第23页 |
| 1.3.7 甲醛明胶溶液 | 第23页 |
| 1.3.8 HE染色所需溶液 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-27页 |
| 2.1 牛胶原蛋白提取 | 第24页 |
| 2.2 牛胶原蛋白电泳检测 | 第24-25页 |
| 2.3 牛胶原蛋白载体支架的制备 | 第25页 |
| 2.4 牛胶原蛋白载体支架的检测 | 第25-26页 |
| 2.4.1 透明度观察 | 第25页 |
| 2.4.2 透光率检测 | 第25页 |
| 2.4.3 含水量 | 第25-26页 |
| 2.4.4 机械性能检测 | 第26页 |
| 2.5 牛胶原蛋白载体支架组织结构检测 | 第26-27页 |
| 2.5.1 牛胶原蛋白载体支架冰冻切片与HE染色 | 第26页 |
| 2.5.2 超微结构 | 第26-27页 |
| 3 实验结果 | 第27-31页 |
| 3.1 牛胶原蛋白电泳检测结果 | 第27页 |
| 3.2 牛胶原蛋白载体支架的理化性质 | 第27-30页 |
| 3.2.1 外观观察 | 第27-28页 |
| 3.2.2 透光率 | 第28-29页 |
| 3.2.3 含水量 | 第29页 |
| 3.2.4 机械性能 | 第29-30页 |
| 3.3 牛胶原蛋白载体支架的组织结构 | 第30-31页 |
| 3.3.1 牛胶原蛋白载体支架的HE染色结果 | 第30页 |
| 3.3.2 超微结构观察结果 | 第30-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 5 本章小结 | 第32-33页 |
| 第三章 人角膜基质细胞的培养与鉴定 | 第33-48页 |
| 1 材料与用品 | 第33-35页 |
| 1.1 实验材料 | 第33页 |
| 1.2 实验仪器 | 第33-34页 |
| 1.3 实验试剂 | 第34页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第34-35页 |
| 1.4.1 DMEM/F12(1：1)培养液的配制 | 第34-35页 |
| 1.4.2 D-Hanks平衡盐溶液 | 第35页 |
| 1.4.3 0.25 %胰蛋白酶 | 第35页 |
| 1.4.4 磷酸缓冲液 | 第35页 |
| 1.4.5 吉姆萨染液 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-41页 |
| 2.1 人角膜细胞的体外扩增培养 | 第35-36页 |
| 2.2 人角膜基质细胞的增殖特性分析 | 第36页 |
| 2.3 人角膜细胞的核型分析 | 第36-37页 |
| 2.4 人角膜基质细胞免疫化学检测 | 第37-38页 |
| 2.5 HCSC实时荧光定量PCR检测 | 第38-41页 |
| 2.5.1 总RNA提取 | 第38-39页 |
| 2.5.2 cDNA的合成 | 第39页 |
| 2.5.3 PCR引物设计 | 第39-40页 |
| 2.5.4 引物特异性验证 | 第40页 |
| 2.5.5 Real-time PCR扩增 | 第40-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-44页 |
| 3.1 人角膜基质细胞的传代培养及形态观察 | 第41页 |
| 3.2 人角膜基质细胞的增殖特性分析 | 第41-42页 |
| 3.3 人角膜基质细胞的染色体组型分析 | 第42-43页 |
| 3.4 人角膜基质细胞标志及功能蛋白表达 | 第43页 |
| 3.5 人角膜基质细胞生长、增殖等相关因子表达情况 | 第43-44页 |
| 3.5.1 提取得到的总RNA质量检测结果 | 第43-44页 |
| 3.5.2 引物特异性检测 | 第44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 5 本章小结 | 第46-48页 |
| 第四章 牛胶原蛋白三维载体支架与人角膜基质细胞 | 第48-63页 |
| 1 实验仪器与材料 | 第48-51页 |
| 1.1 实验材料 | 第48页 |
| 1.2 实验仪器 | 第48-49页 |
| 1.3 实验试剂 | 第49页 |
| 1.4 主要溶液配制方法 | 第49-51页 |
| 1.4.1 0.1 mol/L磷酸氢二钠水溶液 | 第49-50页 |
| 1.4.2 PBS缓冲液 | 第50页 |
| 1.4.3 甲醛明胶溶液 | 第50页 |
| 1.4.4 20 %蔗糖溶液 | 第50页 |
| 1.4.5 伊红-苏木精染色所用溶液 | 第50-51页 |
| 2 实验方法 | 第51-55页 |
| 2.1 牛胶原蛋白载体支架的灭菌处理 | 第51页 |
| 2.2 人角膜基质细胞的DiI标记 | 第51页 |
| 2.3 人角膜基质细胞的接种和体外培养 | 第51-52页 |
| 2.4 胶原蛋白载体支架的生物相容性检测 | 第52-55页 |
| 2.4.1 载体支架浸提液对HCSC活力影响作用分析 | 第52-53页 |
| 2.4.2 人角膜基质细胞与支架复合物的DiI荧光观察 | 第53页 |
| 2.4.3 人角膜基质细胞与载体支架复合物的HE染色 | 第53页 |
| 2.4.4 人角膜基质细胞与载体支架复合物的超微结构观察 | 第53页 |
| 2.4.5 人角膜基质细胞与载体支架复合物的免疫荧光检测 | 第53-54页 |
| 2.4.6 人角膜基质细胞与载体支架复合物的实时定量PCR检测 | 第54-55页 |
| 3 结果 | 第55-61页 |
| 3.1 浸提液法检测结果 | 第55-57页 |
| 3.1.1 细胞形态学评价 | 第55-56页 |
| 3.1.2 增殖能力检测结果 | 第56-57页 |
| 3.2 HE染色与荧光观察 | 第57-58页 |
| 3.3 免疫组织化学检测 | 第58页 |
| 3.4 超微结构观察 | 第58-59页 |
| 3.5 载体支架中HCSC生长和增殖相关因子表达 | 第59-61页 |
| 3.5.1 总RNA检测结果 | 第59页 |
| 3.5.2 引物特异性检测结果 | 第59-60页 |
| 3.5.3 实时荧光定量PCR | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 5 本章小结 | 第62-63页 |
| 全文总结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 个人简历 | 第70页 |
| 在学期间发表的学术论文及专利 | 第70页 |
