| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 1 绪论 | 第8-21页 |
| 1.1 α-半乳糖苷酶简介 | 第8-12页 |
| 1.1.1 α-半乳糖苷酶的来源 | 第8页 |
| 1.1.2 α-半乳糖苷酶的分类 | 第8-9页 |
| 1.1.3 α-半乳糖苷酶的结构与功能 | 第9页 |
| 1.1.4 α-半乳糖苷酶的应用 | 第9-12页 |
| 1.2 酵母表达系统的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.3 基因剂量对毕赤酵母表达系统的影响 | 第14-18页 |
| 1.3.1 多拷贝方法的分类 | 第14-17页 |
| 1.3.2 多拷贝表达载体的构建方法 | 第17-18页 |
| 1.4 内质网分泌相关蛋白对酵母表达系统的影响 | 第18-20页 |
| 1.4.1 分子伴侣 | 第18页 |
| 1.4.2 非折叠蛋白响应 | 第18-20页 |
| 1.5 研究意义与目的 | 第20-21页 |
| 2 实验材料与方法 | 第21-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 酶及生化试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 主要培养基及溶液 | 第21-23页 |
| 2.1.4 主要实验仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-43页 |
| 2.2.1 α-半乳糖苷酶重组表达质粒的构建 | 第23-28页 |
| 2.2.2 α-半乳糖苷酶重组表达菌株的构建和表达 | 第28-29页 |
| 2.2.3 α-半乳糖苷酶酶学性质的研究 | 第29-30页 |
| 2.2.4 α-半乳糖苷酶多拷贝重组表达菌株的构建和表达 | 第30-32页 |
| 2.2.5 内质网分泌蛋白相关基因与 α-半乳糖苷酶基因共表达重组质粒及菌株的构建 | 第32-39页 |
| 2.2.6 α-半乳糖苷酶多拷贝重组酵母菌株Gal A基因拷贝数的检测 | 第39-41页 |
| 2.2.7 α-半乳糖苷酶重组表达酵母 14 L水平的高密度发酵 | 第41-43页 |
| 3 实验结果和讨论 | 第43-62页 |
| 3.1 实验结果 | 第43-58页 |
| 3.1.1 α-半乳糖苷酶重组表达质粒的构建 | 第43-44页 |
| 3.1.2 α-半乳糖苷酶的酶学性质 | 第44-46页 |
| 3.1.3 α-半乳糖苷酶多拷贝重组表达质粒的构建 | 第46-47页 |
| 3.1.4 荧光定量PCR检测多拷贝重组表达菌株Gal A基因插入拷贝数 | 第47-50页 |
| 3.1.5 基因剂量对 α-半乳糖苷酶表达的影响 | 第50-52页 |
| 3.1.6 内质网分泌蛋白相关基因与 α-半乳糖苷酶基因共表达重组质粒及菌株的构建 | 第52-54页 |
| 3.1.7 共表达与内质网分泌相关蛋白对 α-半乳糖苷酶表达量的影响 | 第54-56页 |
| 3.1.8 α-半乳糖苷酶 14L水平的高密度发酵 | 第56-58页 |
| 3.2 讨论 | 第58-62页 |
| 3.2.1 基因剂量对 α-半乳糖苷酶表达的影响 | 第58-59页 |
| 3.2.2 内质网分泌蛋白相关基因对 α-半乳糖苷酶表达的影响 | 第59-60页 |
| 3.2.3 α-半乳糖苷的研究现状 | 第60-62页 |
| 4 总结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第70页 |
