| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1.前言 | 第10-19页 |
| 1.1 wnt16基因调节骨代谢的研究进展 | 第10-16页 |
| 1.1.1 骨质疏松症简介 | 第10-11页 |
| 1.1.2 WNT16基因与人类骨密度关联 | 第11页 |
| 1.1.3 wnt16 KO小鼠骨密度下降 | 第11-12页 |
| 1.1.4 wnt16敲降斑马鱼造血干细胞分化缺陷 | 第12-15页 |
| 1.1.5 wnt16基因调节骨代谢机制分析 | 第15-16页 |
| 1.2 CRISPR/CAS9基因编辑技术概述 | 第16-18页 |
| 1.3 研究意义 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-34页 |
| 2.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 实验相关溶 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-34页 |
| 2.2.1 斑马鱼的饲养 | 第22页 |
| 2.2.2 CRISPR/Cas9基因敲除靶位点设计 | 第22-23页 |
| 2.2.3 引物设计与引物正确性检验 | 第23-25页 |
| 2.2.4 特异性gRNA体外合成 | 第25-28页 |
| 2.2.5 斑马鱼胚胎显微注射 | 第28页 |
| 2.2.6 T7E1酶切法和Sanger测序检测靶位点的有效性 | 第28-30页 |
| 2.2.7 斑马鱼突变体的筛选 | 第30-33页 |
| 2.2.8 F2代斑马鱼幼鱼体长检测 | 第33页 |
| 2.2.9 F2代斑马鱼幼鱼软骨染色 | 第33-34页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第34-46页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除斑马鱼wnt16基因 | 第34-44页 |
| 3.1.1 体外合成特异性gRNA | 第34-36页 |
| 3.1.2 F0代斑马鱼胚胎有效性鉴定 | 第36-37页 |
| 3.1.3 F0代斑马鱼突变体的筛选 | 第37-39页 |
| 3.1.4 F1代斑马鱼胚胎突变遗传性的检测及F1代突变体筛选 | 第39-43页 |
| 3.1.5 F2代突变型纯合斑马鱼筛选 | 第43-44页 |
| 3.2 F2代斑马鱼幼鱼表型 | 第44-46页 |
| 3.2.1 Wnt16(21)F2斑马鱼阿尔辛蓝染色鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.2 Wnt16(14)F2斑马鱼体长鉴定 | 第45-46页 |
| 4. 讨论 | 第46-49页 |
| 5. 研究小结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录 1 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
