| 第一章 前言 | 第9-26页 |
| 1.1 HBsAg的分子生物学 | 第9-14页 |
| 1.2 乙肝表面抗原SP表达的研究 | 第14-15页 |
| 1.3 乙肝疫苗的发展 | 第15-17页 |
| 1.4 CHO细胞表达系统 | 第17-23页 |
| 1.5 立题背景 | 第23-24页 |
| 1.6 可行性分析 | 第24-26页 |
| 第二章 乙肝表面抗原(HBsAg)S基因的克隆及基因突变 | 第26-36页 |
| 2.1 材料和方法 | 第26-32页 |
| 2.1.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.2 方法 | 第27-32页 |
| 2.1.2.1 生产细胞株C28基因组DNA的提取 | 第27页 |
| 2.1.2.2 S基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.1.2.3 S基因PCR产物与T载体的连接与转化 | 第28页 |
| 2.1.2.4 质粒DNA的提取和回收 | 第28页 |
| 2.1.2.5 DNA酶切 | 第28页 |
| 2.1.2.6 S基因中稀有密码子的突变 | 第28-32页 |
| 2.2 结果 | 第32-35页 |
| 2.2.1 细胞C28基因组DNA的提取 | 第32页 |
| 2.2.2 S基因的扩增 | 第32-33页 |
| 2.2.3 S基因与pMD 18T载体的连接，转化及鉴定 | 第33页 |
| 2.2.4 S基因的突变 | 第33-35页 |
| 2.3 讨论 | 第35页 |
| 2.4 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 表达载体的构建 | 第36-51页 |
| 3.1 材料和方法 | 第37-38页 |
| 3.1.1 材料 | 第37页 |
| 3.1.2 方法 | 第37-38页 |
| 3.1.2.1 dhfr基因的扩增 | 第37页 |
| 3.1.2.2 SV弱+dhfr基因的扩增 | 第37页 |
| 3.1.2.3 SV弱+neo基因的扩增 | 第37-38页 |
| 3.1.2.4 1 号表达载体的构建 | 第38页 |
| 3.1.2.5 3 号表达载体的构建 | 第38页 |
| 3.2 结果 | 第38-48页 |
| 3.2.1 dhfr、SV弱+neo、SV弱+dhfr三个基因片段的扩增 | 第38-40页 |
| 3.2.2 表达载体的构建 | 第40-48页 |
| 3.3 讨论 | 第48-50页 |
| 3.4 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 重组CHO高产细胞株的构建及筛选 | 第51-63页 |
| 4.1 材料和方法 | 第51-55页 |
| 4.1.1 材料 | 第51页 |
| 4.1.2 方法 | 第51-55页 |
| 4.1.2.1 质粒的大量制备 | 第51-52页 |
| 4.1.2.2 CHO dhfr 细胞的培养 | 第52页 |
| 4.1.2.3 目的基因的导入 | 第52-53页 |
| 4.1.2.4 加压筛选 | 第53-54页 |
| 4.1.2.5 抗性细胞的单克隆筛选 | 第54页 |
| 4.1.2.6 单克隆的放大培养 | 第54-55页 |
| 4.1.2.7 单层细胞培养的分泌动态研究 | 第55页 |
| 4.2 结果 | 第55-61页 |
| 4.3 讨论 | 第61-62页 |
| 4.4 小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 中文摘要 | 第68-71页 |
| 英文摘要 | 第71页 |
| 附录 | 第75-79页 |
| 附图1. S基因测序图 | 第75-76页 |
| 附图2. Sm基因测序图 | 第76-77页 |
| 附图3. dhfr基因测序图 | 第77-78页 |
| 附图4. SV弱+dhfr基因测序图 | 第78-79页 |
| 附图5. SV弱+neo基因测序图 | 第79页 |
