| 摘要 | 第9-13页 |
| ABSTRACT | 第13-17页 |
| 英文缩写 | 第18-19页 |
| 综述：荧光共振能量转移技术概述 | 第19-25页 |
| 第一节 FRET技术概述 | 第19-21页 |
| 第二节 FRET技术基本原理 | 第21-25页 |
| 第一章 宽场FRET显微镜成像实验技术平台的建立 | 第25-38页 |
| 第一节 供受体荧光光谱窜扰及渗漏参数的测定 | 第26-32页 |
| 1. 实验材料及方法 | 第27-29页 |
| 1.1 质粒大量制备 | 第27页 |
| 1.2 细胞培养 | 第27页 |
| 1.3 基因转染 | 第27页 |
| 1.4 活细胞观察 | 第27-28页 |
| 1.5 活细胞图像采集 | 第28页 |
| 1.6 图像荧光强度测定及参数a参数b值的测定 | 第28-29页 |
| 2. 实验结果 | 第29-30页 |
| 2.1 参数a的测定 | 第29-30页 |
| 2.2 参数b的测定 | 第30页 |
| 3. 实验结果讨论 | 第30-32页 |
| 第二节 公式选择和阳性及阴性实验组FRET测定 | 第32-38页 |
| 1. 实验材料及方法 | 第33-35页 |
| 1.1 阳性对照质粒的构建 | 第33页 |
| 1.2 细胞培养(见前节) | 第33页 |
| 1.3 基因转染 | 第33-34页 |
| 1.4 活细胞观察(见前节) | 第34页 |
| 1.5 活细胞图像采集(见前节) | 第34页 |
| 1.6 均一化数学公式及图像处理方法 | 第34-35页 |
| 1.7 基于FRET信号强度的活细胞色彩图的制作 | 第35页 |
| 1.8 数据的统计处理 | 第35页 |
| 2. 实验结果 | 第35-37页 |
| 2.1 FRET测定及利用不同数学均一化公式的计算结果 | 第35-36页 |
| 2.2 活细胞成像实验结果 | 第36-37页 |
| 3. 实验结果讨论 | 第37-38页 |
| 第二章 通过c-Fos/c-Jun异源蛋白二聚化数学模型研究活细胞中不同供体与受体浓度比例对FRET成像公式的影响 | 第38-55页 |
| 1. 实验材料及方法 | 第39-44页 |
| 1.1 CFP-Jun与YFP-Fos以及YFP-Fos(delta Zip)质粒的构建 | 第39-40页 |
| 1.2 细胞培养(见前章节) | 第40页 |
| 1.3 基因转染 | 第40页 |
| 1.4 活细胞观察(见前章节) | 第40页 |
| 1.5 活细胞图像采集(见前章节) | 第40页 |
| 1.6 显微镜上测定G参数的方法 | 第40-44页 |
| 1.7 统计学处理方法 | 第44页 |
| 2. 实验结果 | 第44-50页 |
| 2.1 Fos/Jun异源相互作用的测定 | 第44-47页 |
| 2.2 在不同浓度比例的CFP-Jun和YFP-Fos下用三通道FRET显微镜研究CFP-Jun和YFP-Fos的异源二聚化相互作用 | 第47-50页 |
| 3. 实验结果讨论 | 第50-55页 |
| 第三章 运用FRET技术研究活细胞内FADD自身相互作用 | 第55-75页 |
| 1. 实验材料及方法 | 第56-62页 |
| 1.1 FADD及其变体荧光融合蛋白的构建 | 第56-59页 |
| 1.2 细胞培养(见前节) | 第59页 |
| 1.3 基因转染 | 第59页 |
| 1.4 定性荧光光谱实验 | 第59-60页 |
| 1.5 基于三通道荧光显微镜定量敏化FRET的测量 | 第60-61页 |
| 1.6 细胞凋亡的荧光显微观察 | 第61页 |
| 1.7 统计学处理 | 第61-62页 |
| 2. 实验结果 | 第62-71页 |
| 2.1 定性荧光光谱实验测定FADD及其变体自身的相互作用 | 第62-64页 |
| 2.2 FRET显微镜定量研究FADD及其变体在活细胞中的相互作用 | 第64-70页 |
| 2.3 转染FADD及其变体细胞相对凋亡率统计 | 第70-71页 |
| 3. 实验结果讨论 | 第71-75页 |
| 第四章 基于FRET技术的活细胞钙离子荧光探针的构建 | 第75-87页 |
| 1. 实验材料及方法 | 第77-80页 |
| 1.1 基于荧光蛋白的钙离子探针的构建 | 第77-79页 |
| 1.2 细胞培养(见前节) | 第79页 |
| 1.3 基因转染 | 第79页 |
| 1.4 活细胞荧光比例成像 | 第79-80页 |
| 2. 实验结果 | 第80-83页 |
| 2.1 探针活细胞荧光比例成像全记录 | 第80-82页 |
| 2.2 伪彩色图显示内源性钙离子的释放和外源性钙离子的进入 | 第82-83页 |
| 3. 实验结果讨论 | 第83-87页 |
| 第五章 基于FRET技术的活细胞锌离子荧光探针的构建 | 第87-107页 |
| 1. 实验材料及方法 | 第89-94页 |
| 1.1 基于荧光蛋白的锌离子探针的构建 | 第89-90页 |
| 1.2 蛋白体外表达及纯化 | 第90页 |
| 1.3 等温滴定方法体外测定锌离子和铜离子与探针的结合 | 第90-91页 |
| 1.4 探针体外荧光光谱检测 | 第91页 |
| 1.5 探针体外结合金属离子特异性检测 | 第91页 |
| 1.6 金属离子竞争结合性实验 | 第91-92页 |
| 1.7 探针活细胞内用于锌离子的成像检测 | 第92-94页 |
| 2. 实验结果 | 第94-104页 |
| 2.1 探针ECFP-MT2A-α-cpCitrine174的体外锌离子铜离子结合测定 | 第94-96页 |
| 2.2 荧光光谱实验证实探针可高效的对锌离子作出反应. | 第96-98页 |
| 2.3 探针对各种金属离子的反应性检测 | 第98-100页 |
| 2.4 金属离子竞争性试验 | 第100-101页 |
| 2.5 活细胞成像实验证明探针在活体内能很好的监测锌离子的变化 | 第101-104页 |
| 3. 实验结果讨论 | 第104-107页 |
| 参考文献 | 第107-121页 |
| 全文总结 | 第121-122页 |
| 附录一：主要的仪器设备和试剂 | 第122-125页 |
| 附录二：博士在读期间发表论文及参编教材 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127-129页 |
