| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 1. 绪论 | 第19-48页 |
| 1.1 植物马槟榔的研究现状 | 第19-25页 |
| 1.1.1 植物马槟榔的生物学分类 | 第19-20页 |
| 1.1.2 植物马槟榔的生物学形态特征 | 第20-22页 |
| 1.1.3 植物马槟榔的野生植物生境 | 第22页 |
| 1.1.4 植物马槟榔的野生资源分布 | 第22-23页 |
| 1.1.5 植物马槟榔的生长特性 | 第23页 |
| 1.1.6 植物马槟榔的药用价值 | 第23-24页 |
| 1.1.7 植物马槟榔的人工引种驯化栽培 | 第24-25页 |
| 1.2 植物甜蛋白的研究现状及其开发利用前景 | 第25-33页 |
| 1.2.1 植物甜蛋白莫乃灵(Monellin)的研究现状及其开发利用前景 | 第25-27页 |
| 1.2.2 植物甜蛋白沙马汀(Thaumatin)的研究现状及其开发利用前景 | 第27-30页 |
| 1.2.3 植物甜蛋白布拉齐因(Brazzein)的研究现状及其开发利用前景 | 第30-31页 |
| 1.2.4 植物甜蛋白神秘果素(Miraculin)的研究现状及其开发利用前景 | 第31-32页 |
| 1.2.5 植物甜蛋白库克灵(Curculin)的研究现状及其开发利用前景 | 第32页 |
| 1.2.6 植物甜蛋白潘塔亭(Pentadin)的研究现状及其开发利用前景 | 第32-33页 |
| 1.3 植物甜蛋白马宾灵的研究现状 | 第33-37页 |
| 1.3.1 植物甜蛋白马宾灵的分离纯化 | 第33-34页 |
| 1.3.2 植物甜蛋白马宾灵的甜味活性与热稳定性 | 第34-35页 |
| 1.3.3 植物甜蛋白马宾灵的蛋白质结构 | 第35-36页 |
| 1.3.4 植物甜蛋白马宾灵的基因结构 | 第36页 |
| 1.3.5 植物甜蛋白马宾灵的开发利用现状 | 第36-37页 |
| 1.4 蛋白质表达系统的研究现状 | 第37-44页 |
| 1.4.1 大肠杆菌表达系统的研究现状 | 第37-40页 |
| 1.4.1.1 大肠杆菌表达系统的表达载体 | 第38-39页 |
| 1.4.1.2 大肠杆菌表达系统的表达宿主菌 | 第39页 |
| 1.4.1.3 大肠杆菌表达系统的表达水平影响因素 | 第39-40页 |
| 1.4.1.4 大肠杆菌表达系统的表达培养条件 | 第40页 |
| 1.4.2 食品级乳酸乳球菌表达系统的研究现状 | 第40-44页 |
| 1.4.2.1 食品级乳酸乳球菌表达系统 | 第41页 |
| 1.4.2.2 食品级的选择标志 | 第41-42页 |
| 1.4.2.3 食品级诱导剂 | 第42页 |
| 1.4.2.4 食品级调控因子 | 第42-43页 |
| 1.4.2.5 食品级乳酸乳球菌表达系统的表达影响因素 | 第43-44页 |
| 1.5 研究的目的意义与研究背景 | 第44-45页 |
| 1.6 主要研究内容与技术路线 | 第45-48页 |
| 1.6.1 主要研究内容 | 第45-47页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第47-48页 |
| 2.天然马宾灵的分离纯化及其兔源多克隆抗体的制备 | 第48-59页 |
| 2.1 实验材料 | 第48页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 2.1.2 生化试剂 | 第48页 |
| 2.1.3 常用试剂盒 | 第48页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第48页 |
| 2.2 常用实验试剂 | 第48-49页 |
| 2.3 实验方法 | 第49-54页 |
| 2.3.1 天然马宾灵的分离纯化 | 第49-51页 |
| 2.3.1.1 马槟榔种子的预处理 | 第49-50页 |
| 2.3.1.2 马宾灵的过柱分离纯化 | 第50页 |
| 2.3.1.3 Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳 | 第50-51页 |
| 2.3.2 马宾灵的兔源多克隆抗体的制备 | 第51-53页 |
| 2.3.2.1 马宾灵蛋白免疫新西兰大白兔 | 第51-52页 |
| 2.3.2.2 马宾灵兔源多克隆抗体的抗原亲和纯化 | 第52-53页 |
| 2.3.3 马宾灵兔源多克隆抗体的ELISA测试 | 第53页 |
| 2.3.4 马宾灵兔源多克隆抗体的Western-Blot鉴定 | 第53-54页 |
| 2.4 实验结果 | 第54-56页 |
| 2.4.1 天然马宾灵的分离与纯化 | 第54-55页 |
| 2.4.2 马宾灵兔源多克隆抗体的ELISA测试 | 第55-56页 |
| 2.4.3 马宾灵兔源多克隆抗体的Western-Blot鉴定 | 第56页 |
| 2.5 结论与讨论 | 第56-58页 |
| 2.5.1 天然马宾灵的分离纯化 | 第56-57页 |
| 2.5.2 马宾灵兔源多克隆抗体的制备与鉴定 | 第57-58页 |
| 2.6 小结 | 第58-59页 |
| 3. 重组马宾灵在大肠杆菌中包涵体形式的表达与分离纯化 | 第59-106页 |
| 3.1 实验材料 | 第59-60页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第59页 |
| 3.1.2 酶与生化试剂 | 第59页 |
| 3.1.3 常用试剂盒 | 第59页 |
| 3.1.4 PCR引物设计 | 第59-60页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第60页 |
| 3.2 常用培养基及实验试剂 | 第60-61页 |
| 3.2.1 培养基配方 | 第60-61页 |
| 3.2.2 实验试剂配方 | 第61页 |
| 3.3 实验方法 | 第61-78页 |
| 3.3.1 马宾灵基因的剪接重组 | 第61-67页 |
| 3.3.1.1 重组马宾灵基因MBL-BH的剪切重组与亚克隆 | 第61-66页 |
| 3.3.1.1.1 重组马宾灵基因MBL-BH的PCR扩增 | 第61-62页 |
| 3.3.1.1.2 重组马宾灵基因MBL-BH的PCR产物纯化 | 第62-63页 |
| 3.3.1.1.3 重组马宾灵基因MBL-BH与pMD18-T simple连接 | 第63页 |
| 3.3.1.1.4 大肠杆菌TOP10F'感受态细胞的制备与转化 | 第63-64页 |
| 3.3.1.1.5 重组克隆载体pMD18-T-MBL-BH质粒DNA的提取 | 第64页 |
| 3.3.1.1.6 重组克隆载体pMD18-T-MBL-BH的鉴定 | 第64-65页 |
| 3.3.1.1.7 重组克隆载体pMD18-T-MBL-BH的测序及序列分析 | 第65-66页 |
| 3.3.1.2 重组马宾灵基因MBL-ABH的剪切重组与亚克隆 | 第66页 |
| 3.3.1.2.1 重组马宾灵基因MBL-ABH的PCR扩增 | 第66页 |
| 3.3.1.2.2 重组克隆载体pMD18-T-MBL-ABH的构建 | 第66页 |
| 3.3.1.3 重组马宾灵基因MBL-AXBH的剪切重组与亚克隆 | 第66-67页 |
| 3.3.1.3.1 重组马宾灵基因MBL-AXBH的PCR扩增 | 第67页 |
| 3.3.1.3.2 重组克隆载体pMD18-T-MBL-AXBH的构建 | 第67页 |
| 3.3.2 重组马宾灵大肠杆菌表达载体的构建 | 第67-69页 |
| 3.3.2.1 大肠杆菌表达载体pET-30a质粒DNA的双酶切 | 第67页 |
| 3.3.2.2 双酶切大肠杆菌表达载体pET-30a的DNA胶回收 | 第67-68页 |
| 3.3.2.3 重组马宾灵基因的DNA片段的双酶切 | 第68页 |
| 3.3.2.3.1 重组马宾灵基因的克隆载体质粒DNA的双酶切 | 第68页 |
| 3.3.2.3.2 重组马宾灵基因片段的DNA胶回收 | 第68页 |
| 3.3.2.4 重组马宾灵基因与大肠杆菌表达载体pET-30a的连接 | 第68-69页 |
| 3.3.2.5 重组马宾灵大肠杆菌表达载体的鉴定 | 第69页 |
| 3.3.2.6 重组马宾灵大肠杆菌表达载体的测序及序列分析 | 第69页 |
| 3.3.3 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的构建 | 第69页 |
| 3.3.3.1 大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞的制备及转化 | 第69页 |
| 3.3.3.2 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的鉴定 | 第69页 |
| 3.3.4 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导表达分析 | 第69-70页 |
| 3.3.4.1 重组马宾灵的诱导表达分析 | 第70页 |
| 3.3.4.2 重组马宾灵的诱导表达蛋白形式分析 | 第70页 |
| 3.3.5 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导表达优化 | 第70-72页 |
| 3.3.5.1 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导IPTG浓度优化 | 第70-71页 |
| 3.3.5.2 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导乳糖浓度优化 | 第71页 |
| 3.3.5.3 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导起始OD_(600)优化 | 第71页 |
| 3.3.5.4 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导时间优化 | 第71-72页 |
| 3.3.5.5 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导温度优化 | 第72页 |
| 3.3.6 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的大规模诱导表达 | 第72页 |
| 3.3.7 重组马宾灵包涵体蛋白的变性条件分析 | 第72-73页 |
| 3.3.7.1 重组马宾灵包涵体蛋白的收集 | 第72页 |
| 3.3.7.2 重组马宾灵包涵体蛋白的洗涤 | 第72-73页 |
| 3.3.7.2.1 重组马宾灵包涵体蛋白洗涤液的优化 | 第72-73页 |
| 3.3.7.2.2 重组马宾灵包涵体蛋白的洗涤 | 第73页 |
| 3.3.7.3 重组马宾灵包涵体蛋白的变性 | 第73页 |
| 3.3.7.3.1 重组马宾灵包涵体蛋白变性液的优化 | 第73页 |
| 3.3.7.3.2 重组马宾灵包涵体蛋白的变性 | 第73页 |
| 3.3.8 重组马宾灵变性包涵体蛋白的复性 | 第73-76页 |
| 3.3.8.1 重组马宾灵变性包涵体蛋白的分离纯化 | 第73-74页 |
| 3.3.8.2 重组马宾灵变性包涵体蛋白的梯度稀释复性 | 第74-75页 |
| 3.3.8.3 重组马宾灵变性包涵体蛋白的优化复性 | 第75-76页 |
| 3.3.8.3.1 重组马宾灵变性包涵体蛋白的复性蛋白质浓度优化 | 第75页 |
| 3.3.8.3.2 重组马宾灵变性包涵体蛋白的复性液pH优化 | 第75-76页 |
| 3.3.8.3.3 重组马宾灵变性包涵体蛋白的复性液氧化还原电势优化 | 第76页 |
| 3.3.8.3.4 重组马宾灵变性包涵体蛋白的复性液甘氨酸浓度优化 | 第76页 |
| 3.3.8.3.5 重组马宾灵变性包涵体蛋白的复性液精氨酸浓度优化 | 第76页 |
| 3.3.8.4 重组马宾灵变性包涵体蛋白的大规模复性 | 第76页 |
| 3.3.9 重组马宾灵的鉴定与活性分析 | 第76-78页 |
| 3.3.9.1 重组马宾灵的Western-blot鉴定 | 第76-77页 |
| 3.3.9.2 重组马宾灵的MALDI-TOF-TOF鉴定 | 第77页 |
| 3.3.9.3 重组马宾灵的甜味活性鉴定 | 第77页 |
| 3.3.9.4 重组马宾灵的热稳定性鉴定 | 第77-78页 |
| 3.4 结果与分析 | 第78-99页 |
| 3.4.1 马宾灵基因的重组 | 第78-79页 |
| 3.4.2 重组马宾灵大肠杆菌表达载体的构建 | 第79-80页 |
| 3.4.3 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的构建 | 第80页 |
| 3.4.4 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导表达 | 第80-83页 |
| 3.4.4.1 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导表达分析 | 第80-81页 |
| 3.4.4.2 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导表达蛋白形式分析 | 第81-83页 |
| 3.4.5 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的优化诱导条件 | 第83-87页 |
| 3.4.5.1 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的最佳IPTG浓度 | 第83页 |
| 3.4.5.2 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的最佳乳糖浓度 | 第83-84页 |
| 3.4.5.3 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的最佳起始OD_(600) | 第84-85页 |
| 3.4.5.4 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的最佳诱导时间 | 第85-86页 |
| 3.4.5.5 重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的最佳诱导温度 | 第86-87页 |
| 3.4.6 重组马宾灵包涵体蛋白的变性 | 第87-89页 |
| 3.4.6.1 重组马宾灵包涵体蛋白的最佳包涵体洗涤液 | 第87-88页 |
| 3.4.6.2 重组马宾灵包涵体蛋白的最佳包涵体变性液 | 第88-89页 |
| 3.4.7 重组马宾灵包涵体蛋白的复性 | 第89-94页 |
| 3.4.7.1 重组马宾灵变性包涵体蛋白的纯化 | 第89页 |
| 3.4.7.2 重组马宾灵变性包涵体蛋白的复性优化 | 第89-93页 |
| 3.4.7.2.1 重组马宾灵变性包涵体蛋白的最佳复性蛋白质浓度 | 第89-90页 |
| 3.4.7.2.2 重组马宾灵变性包涵体蛋白的最佳复性液pH | 第90-91页 |
| 3.4.7.2.3 重组马宾灵变性包涵体蛋白的最佳复性液氧化还原电势 | 第91页 |
| 3.4.7.2.4 重组马宾灵变性包涵体蛋白的最佳复性液甘氨酸浓度 | 第91-92页 |
| 3.4.7.2.5 重组马宾灵变性包涵体蛋白的最佳复性液精氨酸浓度 | 第92-93页 |
| 3.4.7.3 重组马宾灵变性包涵体蛋白的复性 | 第93-94页 |
| 3.4.8 重组马宾灵的鉴定与活性分析 | 第94-99页 |
| 3.4.8.1 重组马宾灵的Western-blot鉴定 | 第94-95页 |
| 3.4.8.2 重组马宾灵的MALDI-TOF-TOF分析 | 第95-98页 |
| 3.4.8.3 重组马宾灵的甜味活性鉴定 | 第98-99页 |
| 3.4.8.4 重组马宾灵的热稳定性鉴定 | 第99页 |
| 3.5 结论与讨论 | 第99-103页 |
| 3.5.1 重组马宾灵在大肠杆菌表达系统中的诱导表达蛋白形式 | 第99-100页 |
| 3.5.2 重组马宾灵在大肠杆菌表达系统中的优化诱导表达条件 | 第100-101页 |
| 3.5.3 重组马宾灵包涵体蛋白的变性条件 | 第101-102页 |
| 3.5.4 重组马宾灵变性包涵体蛋白的复性条件 | 第102-103页 |
| 3.5.5 重组马宾灵的分离与纯化过程 | 第103页 |
| 3.6 小结 | 第103-106页 |
| 4. 融合重组马宾灵在大肠杆菌中可溶性形式的表达与分离纯化 | 第106-131页 |
| 4.1 实验材料 | 第106-107页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第106页 |
| 4.1.2 酶与生化试剂 | 第106页 |
| 4.1.3 常用试剂盒 | 第106页 |
| 4.1.4 PCR引物设计 | 第106-107页 |
| 4.1.5 主要仪器设备 | 第107页 |
| 4.2 常用培养基及实验试剂 | 第107页 |
| 4.2.1 培养基的配制 | 第107页 |
| 4.2.2 实验试剂的配制 | 第107页 |
| 4.3 实验方法 | 第107-115页 |
| 4.3.1 重组马宾灵基因的融合重组 | 第107-109页 |
| 4.3.1.1 融合重组马宾灵基因SUMO-MBL-B的融合重组与亚克隆 | 第107-108页 |
| 4.3.1.1.1 融合重组马宾灵基因SUMO-MBL-B的PCR扩增 | 第108页 |
| 4.3.1.1.2 重组克隆载体pMD18-T-SUMO-MBL-B的构建 | 第108页 |
| 4.3.1.2 融合重组马宾灵基因SUMO-MBL-AB的融合重组与亚克隆 | 第108-109页 |
| 4.3.1.2.1 融合重组马宾灵基因SUMO-MBL-AB的PCR扩增 | 第109页 |
| 4.3.1.2.2 重组克隆载体pMD18-T-SUMO-MBL-AB的构建 | 第109页 |
| 4.3.2 融合重组马宾灵大肠杆菌表达载体的构建 | 第109-110页 |
| 4.3.2.1 大肠杆菌表达载体pET-30a质粒DNA的双酶切 | 第109页 |
| 4.3.2.2 双酶切大肠杆菌表达载体pET-30a的DNA胶回收 | 第109页 |
| 4.3.2.3 融合重组马宾灵基因的DNA片段的双酶切 | 第109-110页 |
| 4.3.2.3.1 融合重组马宾灵基因的克隆载体质粒DNA的双酶切 | 第109-110页 |
| 4.3.2.3.2 融合重组马宾灵基因片段的DNA胶回收 | 第110页 |
| 4.3.2.4 融合重组马宾灵基因与大肠杆菌表达载体的连接 | 第110页 |
| 4.3.2.5 融合重组马宾灵大肠杆菌表达载体的鉴定 | 第110页 |
| 4.3.2.6 融合重组马宾灵大肠杆菌表达载体的测序及序列分析 | 第110页 |
| 4.3.3 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的构建 | 第110-111页 |
| 4.3.3.1 大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞的制备及转化 | 第110页 |
| 4.3.3.2 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的鉴定 | 第110-111页 |
| 4.3.4 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导表达分析 | 第111页 |
| 4.3.4.1 融合重组马宾灵的诱导表达分析 | 第111页 |
| 4.3.4.2 融合重组马宾灵的诱导表达蛋白形式分析 | 第111页 |
| 4.3.5 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性诱导表达优化 | 第111-113页 |
| 4.3.5.1 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导IPTG浓度优化 | 第111页 |
| 4.3.5.2 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导乳糖浓度优化 | 第111-112页 |
| 4.3.5.3 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导起始OD_(600)优化 | 第112页 |
| 4.3.5.4 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导时间优化 | 第112页 |
| 4.3.5.5 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导温度优化 | 第112页 |
| 4.3.5.6 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导摇床转速优化 | 第112-113页 |
| 4.3.6 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的大规模诱导表达 | 第113页 |
| 4.3.7 融合重组马宾灵的分离纯化 | 第113-114页 |
| 4.3.8 融合重组马宾灵的鉴定与活性分析 | 第114-115页 |
| 4.3.8.1 融合重组马宾灵的Western-blot鉴定 | 第114页 |
| 4.3.8.2 融合重组马宾灵的甜味活性鉴定 | 第114-115页 |
| 4.3.8.3 融合重组马宾灵的热稳定性鉴定 | 第115页 |
| 4.4 结果与分析 | 第115-127页 |
| 4.4.1 重组马宾灵基因的融合重组 | 第115-116页 |
| 4.4.2 融合重组马宾灵大肠杆菌表达载体的构建 | 第116-117页 |
| 4.4.3 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的构建 | 第117页 |
| 4.4.4 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可诱导表达 | 第117-119页 |
| 4.4.4.1 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导表达分析 | 第117-119页 |
| 4.4.4.2 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的诱导表达蛋白形式 | 第119页 |
| 4.4.5 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性优化诱导条件 | 第119-124页 |
| 4.4.5.1 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性最佳IPTG浓度 | 第119-120页 |
| 4.4.5.2 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性最佳乳糖浓度 | 第120-121页 |
| 4.4.5.3 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性最佳起始OD_(600) | 第121-122页 |
| 4.4.5.4 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性最佳诱导时间 | 第122页 |
| 4.4.5.5 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性最佳诱导温度 | 第122-123页 |
| 4.4.5.6 融合重组马宾灵大肠杆菌表达工程菌的可溶性最佳诱导摇床转速 | 第123-124页 |
| 4.4.6 融合重组马宾灵的分离纯化 | 第124-125页 |
| 4.4.7 融合重组马宾灵的鉴定与活性分析 | 第125-127页 |
| 4.4.7.1 融合重组马宾灵的Western-blot鉴定 | 第125-126页 |
| 4.4.7.2 融合重组马宾灵的甜味活性鉴定 | 第126-127页 |
| 4.4.7.3 融合重组马宾灵的热稳定性鉴定 | 第127页 |
| 4.5 结论与讨论 | 第127-129页 |
| 4.5.1 融合重组马宾灵在大肠杆菌表达系统中的诱导表达蛋白形式 | 第127-128页 |
| 4.5.2 融合重组马宾灵在大肠杆菌表达系统中的优化诱导表达条件 | 第128-129页 |
| 4.5.3 融合重组马宾灵可溶性蛋白的分离与纯化过程 | 第129页 |
| 4.6 小结 | 第129-131页 |
| 5.重组马宾灵在食品级乳酸乳球菌中的诱导表达分析 | 第131-157页 |
| 5.1 实验材料 | 第131-132页 |
| 5.1.1 菌株与质粒 | 第131页 |
| 5.1.2 酶与生化试剂 | 第131页 |
| 5.1.3 常用试剂盒 | 第131页 |
| 5.1.4 PCR引物设计 | 第131-132页 |
| 5.1.5 主要仪器设备 | 第132页 |
| 5.2 常用培养基及实验试剂 | 第132-133页 |
| 5.2.1 培养基 | 第132页 |
| 5.2.2 实验试剂 | 第132-133页 |
| 5.3 实验方法 | 第133-141页 |
| 5.3.1 马宾灵基因的亚克隆重组 | 第133-135页 |
| 5.3.1.1 重组马宾灵基因Usp45-MBL-BH的重组与亚克隆 | 第133页 |
| 5.3.1.1.1 重组马宾灵基因Usp45-MBL-BH的PCR扩增 | 第133页 |
| 5.3.1.1.2 重组克隆载体的鉴定 | 第133页 |
| 5.3.1.2 重组马宾灵基因Usp45-MBL-ABH的重组与亚克隆 | 第133-134页 |
| 5.3.1.2.1 重组马宾灵基因Usp45-MBL-ABH的PCR扩增 | 第134页 |
| 5.3.1.2.2 重组克隆载体pMD18-T-Usp45-MBL-ABH的构建 | 第134页 |
| 5.3.1.3 重组马宾灵基因MBL-LLBH的重组与亚克隆 | 第134-135页 |
| 5.3.1.3.1 重组马宾灵基因MBL-LLBH的PCR扩增 | 第134页 |
| 5.3.1.3.2 重组克隆载体pMD18-T-MBL-LLBH的构建 | 第134-135页 |
| 5.3.1.4 重组马宾灵基因MBL-LLABH的重组与亚克隆 | 第135页 |
| 5.3.1.4.1 重组马宾灵基因MBL-LLABH的PCR扩增 | 第135页 |
| 5.3.1.4.2 重组克隆载体pMD18-T-MBL-LLABH的构建 | 第135页 |
| 5.3.2 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达载体的构建 | 第135-136页 |
| 5.3.2.1 食品级乳酸乳球菌表达载体pNZ8149质粒DNA的双酶切 | 第135页 |
| 5.3.2.2 双酶切的食品级乳酸乳球菌表达载体pNZ8149的DNA胶回收 | 第135页 |
| 5.3.2.3 重组马宾灵基因的克隆载体质粒DNA的双酶切 | 第135-136页 |
| 5.3.2.4 重组马宾灵基因的DNA片段的DNA胶回收 | 第136页 |
| 5.3.2.5 重组马宾灵基因与食品级乳酸乳球菌表达载体pNZ8149的连接 | 第136页 |
| 5.3.3 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的构建 | 第136-138页 |
| 5.3.3.1 食品级乳酸乳球菌感受态细胞的制备 | 第136-137页 |
| 5.3.3.2 食品级乳酸乳球菌感受态细胞的电击转化 | 第137页 |
| 5.3.3.3 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的鉴定 | 第137-138页 |
| 5.3.4 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的诱导表达分析 | 第138-139页 |
| 5.3.5 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的诱导表达优化 | 第139-141页 |
| 5.3.5.1 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的诱导表达定量分析 | 第139-140页 |
| 5.3.5.1.1 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的诱导样品处理 | 第139页 |
| 5.3.5.1.2 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的ELISA定量分析 | 第139-140页 |
| 5.3.5.1.3 马宾灵的摩尔浓度ELISA定量标准曲线 | 第140页 |
| 5.3.5.2 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的诱导Nisin浓度优化 | 第140页 |
| 5.3.5.3 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的诱导起始OD_(600)优化 | 第140-141页 |
| 5.3.5.4 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的诱导时间优化 | 第141页 |
| 5.3.6 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的Western-blot鉴定 | 第141页 |
| 5.4 结果与分析 | 第141-152页 |
| 5.4.1 马宾灵基因的剪切重组 | 第141-142页 |
| 5.4.2 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的构建 | 第142-145页 |
| 5.4.2.1 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达载体的构建及电击转化食品级乳酸乳球菌 | 第143页 |
| 5.4.2.2 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的鉴定 | 第143-145页 |
| 5.4.3 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的诱导表达分析 | 第145-147页 |
| 5.4.4 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的优化诱导表达条件 | 第147-150页 |
| 5.4.4.1 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的最佳Nisin浓度 | 第147-148页 |
| 5.4.4.2 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的最佳起始OD_(600) | 第148-149页 |
| 5.4.4.3 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的最佳诱导时间 | 第149-150页 |
| 5.4.5 重组马宾灵食品级乳酸乳球菌表达工程菌的Western-blot鉴定 | 第150-152页 |
| 5.5 结论与讨论 | 第152-155页 |
| 5.5.1 重组马宾灵的食品级乳酸乳球菌表达系统的构建 | 第152-153页 |
| 5.5.2 重组马宾灵的食品级乳酸乳球菌表达系统的诱导表达分析 | 第153-155页 |
| 5.6 小结 | 第155-157页 |
| 6. 结论与研究展望 | 第157-165页 |
| 6.1 结论 | 第157-158页 |
| 6.2 讨论 | 第158-161页 |
| 6.2.1 重组马宾灵的蛋白质鉴定 | 第158-159页 |
| 6.2.2 重组马宾灵的甜味活性及其甜味结构分析 | 第159-161页 |
| 6.2.3 重组马宾灵的热稳定性及其热稳定性结构分析 | 第161页 |
| 6.3 研究展望 | 第161-165页 |
| 6.3.1 重组马宾灵的甜味表达形式研究 | 第161-162页 |
| 6.3.2 重组马宾灵的甜味活性结构研究 | 第162页 |
| 6.3.3 重组马宾灵的热稳定性结构研究 | 第162页 |
| 6.3.4 重组马宾灵的蛋白质表达系统研究 | 第162-165页 |
| 参考文献 | 第165-174页 |
| 作者简历 | 第174-176页 |
| 致谢 | 第176页 |
