| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 前言 | 第11-19页 |
| 1.1.蛋白质磷酸化修饰研究进展 | 第11-14页 |
| 1.1.1.蛋白质磷酸化修饰的简介 | 第11-12页 |
| 1.1.2.研究蛋白质磷酸化修饰的技术 | 第12-14页 |
| 1.2.LEA蛋白磷酸化修饰研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.1.LEA蛋白的概述 | 第14页 |
| 1.2.2.LEA蛋白的性质及分类 | 第14-16页 |
| 1.2.3.LEA蛋白的功能研究 | 第16-17页 |
| 1.2.4.LEA蛋白磷酸化修饰的发现及研究 | 第17页 |
| 1.3.本课题研究的意义、目的及内容 | 第17-19页 |
| 第2章 材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1.材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1.植物材料、菌株、载体和抗体 | 第19-20页 |
| 2.1.2.主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3.主要设备与仪器 | 第21-22页 |
| 2.2.主要培养基与试剂的配制 | 第22-24页 |
| 2.2.1 主要培养基的配制 | 第22页 |
| 2.2.2 实验主要用到的缓冲液与试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 质谱样品处理使用试剂 | 第23页 |
| 2.2.4 亲和层析蛋白纯化使用试剂 | 第23页 |
| 2.2.5 引物 | 第23-24页 |
| 2.3.方法 | 第24-35页 |
| 2.3.1.大豆胚根的培养 | 第24-25页 |
| 2.3.2.大豆胚根蛋白的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.2.1.尿素硫脲法 | 第25页 |
| 2.3.2.2.TCA丙酮法 | 第25页 |
| 2.3.2.3.Trizol法 | 第25-26页 |
| 2.3.3.大豆胚根蛋白的定量 | 第26页 |
| 2.3.4.大豆胚根蛋白的双向电泳分析 | 第26-28页 |
| 2.3.5.质谱鉴定 | 第28页 |
| 2.3.6.大豆胚根RNA的提取及反转录 | 第28-29页 |
| 2.3.7.基因的克隆 | 第29页 |
| 2.3.8.酵母表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.9.酵母感受态的制备、转化及验证 | 第30页 |
| 2.3.10. PM18基因点突变载体的构建及其重组酵母的获得 | 第30-31页 |
| 2.3.11.盐胁迫固体平板酵母生长的测定 | 第31-32页 |
| 2.3.12.盐胁迫液体培养基酵母生长的测定 | 第32页 |
| 2.3.13. 表达载体pET28-PM18 的构建、PM18 蛋白表达纯化及鉴定 | 第32页 |
| 2.3.14.PM18蛋白的表达纯化及Western blot检测 | 第32-33页 |
| 2.3.15.激酶及磷酸酶处理PM18蛋白 | 第33-34页 |
| 2.3.16. PM18蛋白的CD谱测定 | 第34页 |
| 2.3.17. PM18蛋白保护LDH酶活的检测 | 第34-35页 |
| 第3章 结果与分析 | 第35-64页 |
| 3.1.PM18蛋白生物信息学分析、磷酸化位点的预测及鉴定 | 第35-41页 |
| 3.1.1.PM18蛋白生物信息学分析及磷酸化位点预测 | 第35-36页 |
| 3.1.2.利用 2DE和LC-MS/MS分析鉴定到3个PM18蛋白磷酸化位点 | 第36-41页 |
| 3.2.过表达PM18及其突变体蛋白能提高酵母耐盐能力 | 第41-55页 |
| 3.2.1.过表达PM18及PM18~(3D)和PM18~(3E)蛋白能提高酵母耐盐能力 | 第42-48页 |
| 3.2.2.PM18的S90和Y136位点的磷酸化修饰能提高酵母抗盐能力 | 第48-51页 |
| 3.2.3.PM18的S90和Y136位点磷酸化修饰在提高盐敏感酵母的耐盐能力上表现为协同作用 | 第51-55页 |
| 3.3.体外磷酸化对PM18蛋白结构和功能的影响 | 第55-64页 |
| 3.3.1.原核表达及Western blot验证PM18蛋白 | 第55-56页 |
| 3.3.2.体外磷酸化PM18蛋白及鉴定 | 第56-61页 |
| 3.3.3.磷酸化修饰有利于PM18蛋白形成 α-螺旋结构 | 第61-62页 |
| 3.3.4.磷酸化PM18蛋白能增强保护LDH酶活的能力 | 第62-64页 |
| 第4章 讨论 | 第64-69页 |
| 4.1.不同的蛋白提取方法对PM18蛋白磷酸化位点的影响 | 第64页 |
| 4.2. PM18蛋白增强酵母耐盐性的机制分析 | 第64-66页 |
| 4.3.磷酸化修饰能影响PM18蛋白的结构及功能 | 第66-69页 |
| 第5章 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-80页 |
| 附录 | 第80-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 攻读硕士期间的科研成果 | 第113页 |
