| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 文献综述 | 第7-20页 |
| 1.1 FXS的致病原因 | 第7-8页 |
| 1.2 FXS的诊断与防治 | 第8页 |
| 1.3 FXS的研究进展 | 第8-10页 |
| 1.4 FMR1基因相关介绍 | 第10-12页 |
| 1.4.1 fragile X mental retardation 1（FMR1）的基因结构 | 第10页 |
| 1.4.2 FMR1基因的功能及研究进展 | 第10-12页 |
| 1.5 表观遗传概况 | 第12-14页 |
| 1.5.1 表观遗传的概念 | 第12页 |
| 1.5.2 DNA甲基化 | 第12-13页 |
| 1.5.3 组蛋白修饰 | 第13-14页 |
| 1.5.4 非编码RNA | 第14页 |
| 1.6 基因编辑技术 | 第14-16页 |
| 1.6.1 ZFN | 第15页 |
| 1.6.2 TALEN | 第15页 |
| 1.6.3 CRISPR/Cas9系统 | 第15-16页 |
| 1.7 表观遗传基因修饰技术 | 第16-18页 |
| 1.8 Casilio技术的原理及应用 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-44页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 细胞、菌株及质粒载体 | 第20页 |
| 2.1.2 实验所用试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 实验耗材及实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.4 本研究中所有引物序列 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-44页 |
| 2.2.1 质粒的构建 | 第24-31页 |
| 2.2.1.1 gRNA质粒的克隆 | 第24-26页 |
| 2.2.1.2 长片段的克隆 | 第26-28页 |
| 2.2.1.3 用Gateway的方法克隆质粒 | 第28页 |
| 2.2.1.4 用In-Fusion~? HD Cloning Kit进行目的序列克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.1.5 菌落PCR鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.1.6 酶切鉴定 | 第30页 |
| 2.2.1.7 质粒大提（Endo Free Plasmid Maxi Kit ，QIAGEN） | 第30-31页 |
| 2.2.2 常用试剂配置 | 第31-32页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第32-34页 |
| 2.2.3.1 293T细胞的培养 | 第32-33页 |
| 2.2.3.1.1 复苏 | 第32页 |
| 2.2.3.1.2 冻存 | 第32-33页 |
| 2.2.3.1.3 传代 | 第33页 |
| 2.2.3.2 人类胚胎干细胞的培养 | 第33-34页 |
| 2.2.3.2.1 复苏 | 第33页 |
| 2.2.3.2.2 冻存（六孔板） | 第33-34页 |
| 2.2.3.2.3 传代 | 第34页 |
| 2.2.4 脂质体转染 293T细胞 | 第34-35页 |
| 2.2.5 Surveyor Assay | 第35-36页 |
| 2.2.6 甲基化检测 | 第36-38页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR（ Real Time PCR, RT-PCR） | 第38-39页 |
| 2.2.7.1 细胞总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.2.7.2 将RNA反转录为cDNA | 第39页 |
| 2.2.7.3 RT-PCR | 第39页 |
| 2.2.8 慢病毒侵染 | 第39-40页 |
| 2.2.9 慢病毒侵染阳性细胞的筛选 | 第40-41页 |
| 2.2.9.1 嘌呤霉素（puro）筛选 | 第40-41页 |
| 2.2.9.2 流式细胞分选 | 第41页 |
| 2.2.11 细胞系支原体检测 | 第41-43页 |
| 2.2.12 统计学分析 | 第43-44页 |
| 第三章 结果与分析 | 第44-54页 |
| 3.1 构建表达Casilio-效应因子融合蛋白的质粒 | 第44-45页 |
| 3.2 确定三种野生型细胞FMR1基因是否可以作为定点甲基化修饰的实验材料 | 第45-46页 |
| 3.3 探究Casilio-DNMT相关质粒是否具有甲基化抑制基因表达的功能 | 第46-50页 |
| 3.4 甲基化实验转染后不同时期收样检测FMR1的mRNA和甲基化水平的变化 | 第50-51页 |
| 3.5 建立稳定表达Casilio hDNMT3A-hDNMT3L的人类胚胎干细胞系 | 第51-54页 |
| 第四章 讨论 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
