| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 符号说明 | 第14-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-37页 |
| 1.1 真菌糖苷水解酶的组成 | 第17-19页 |
| 1.1.1 真菌木质纤维素酶 | 第17-18页 |
| 1.1.2 真菌半纤维素酶 | 第18页 |
| 1.1.3 真菌淀粉酶 | 第18-19页 |
| 1.2 丝状真菌纤维素酶和淀粉酶合成调控研究进展 | 第19-28页 |
| 1.2.1 碳源的诱导作用 | 第19-21页 |
| 1.2.2 纤维素酶和淀粉酶转录水平的调控 | 第21-23页 |
| 1.2.3 转录后水平的调控 | 第23页 |
| 1.2.4 糖转运蛋白的调控作用 | 第23-24页 |
| 1.2.5 Ras信号途径对纤维素酶的表达调控作用 | 第24页 |
| 1.2.6 丝状真菌中G蛋白信号途径的功能及其对产酶的调控作用 | 第24-28页 |
| 1.3 蛋白表达系统概述 | 第28-35页 |
| 1.3.1 原核表达系统 | 第28-29页 |
| 1.3.2 真核表达系统 | 第29-35页 |
| 1.4 本研究的立题依据和研究内容 | 第35-37页 |
| 第二章 草酸青霉纤维素酶信号转导相关基因的预测及功能研究 | 第37-55页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第38-46页 |
| 2.1.1 菌株、质粒及培养条件 | 第38-39页 |
| 2.1.2 常用储备液 | 第39页 |
| 2.1.3 常用试剂与实验仪器 | 第39-40页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第40-43页 |
| 2.1.5 实验具体操作方法 | 第43-46页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第46-53页 |
| 2.2.1 草酸青霉中纤维素酶信号转导相关基因的筛选 | 第46-47页 |
| 2.2.2 草酸青霉纤维素酶信号转导相关基因的敲除 | 第47-49页 |
| 2.2.3 纤维素酶信号转导相关基因缺失株的表型分析 | 第49-51页 |
| 2.2.4 纤维素酶信号转导相关基因缺失株的产酶分析 | 第51-53页 |
| 本章小结 | 第53-55页 |
| 第三章 草酸青霉G蛋白-cAMP信号转导通路对糖苷水解酶的表达调控研究 | 第55-85页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第56-67页 |
| 3.1.1 菌株、质粒及培养条件 | 第56页 |
| 3.1.2 常用储备液 | 第56-57页 |
| 3.1.3 常用试剂与实验仪器 | 第57-58页 |
| 3.1.4 PCR引物 | 第58-59页 |
| 3.1.5 实验具体操作方法 | 第59-67页 |
| 3.2 结果和讨论 | 第67-82页 |
| 3.2.1 草酸青霉PGA3的鉴定与分析 | 第67-68页 |
| 3.2.2 G蛋白PGA3对草酸青霉的形态发生和生长的影响 | 第68-73页 |
| 3.2.3 草酸青霉PGA3对胞内淀粉酶、纤维素酶以及β-葡萄糖苷酶的表达调控 | 第73-77页 |
| 3.2.4 PGA3通过调节转录因子的表达从而调节淀粉酶和纤维素酶的表达 | 第77-78页 |
| 3.2.5 PGA3通过调节胞内cAMP的水平来发挥调控作用 | 第78-80页 |
| 3.2.6 PGA3介导的G蛋白-cAMP信号通路对淀粉酶和纤维素酶的表达调控模式 | 第80-82页 |
| 本章小结 | 第82-85页 |
| 第四章 草酸青霉低背景筛酶系统的构建和应用研究 | 第85-105页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第85-91页 |
| 4.1.1 菌株、质粒及培养条件 | 第85-86页 |
| 4.1.2 常用储备液 | 第86页 |
| 4.1.3 常用试剂与实验仪器 | 第86-87页 |
| 4.1.4 PCR引物 | 第87-88页 |
| 4.1.5 实验具体操作方法 | 第88-91页 |
| 4.2 结果和讨论 | 第91-104页 |
| 4.2.1 草酸青霉中干净的蛋白表达背景的获得 | 第91-95页 |
| 4.2.2 草酸青霉组成型强启动子的筛选 | 第95-98页 |
| 4.2.3 在△15A中高效表达低丰度的木质纤维素酶 | 第98页 |
| 4.2.4 β-葡萄糖苷酶以及木聚糖酶的放大培养 | 第98-99页 |
| 4.2.5 含过表达木质纤维素酶的重组纤维素酶系性质 | 第99-102页 |
| 4.2.6 强启动子在草酸青霉中peni-1中的应用 | 第102-104页 |
| 本章小结 | 第104-105页 |
| 第五章 运用G蛋白信号转导通路原理提高重组蛋白在低背景表达系统中的表达量 | 第105-123页 |
| 5.1 实验材料与方法 | 第105-114页 |
| 5.1.1 菌株、质粒及培养条件 | 第105-106页 |
| 5.1.2 常用储备液 | 第106页 |
| 5.1.3 常用试剂与实验仪器 | 第106页 |
| 5.1.4 PCR引物 | 第106-107页 |
| 5.1.5 实验具体操作方法 | 第107-114页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第114-121页 |
| 5.2.1 过表达淀粉酶转录激活因子AmyR构建高效表达宿主 | 第114-117页 |
| 5.2.2 过表达株Pamyl5A启动子效率的分析 | 第117-118页 |
| 5.2.3 激活菌株中过表达AmyR以提高胞外淀粉酶Amy15A分泌量 | 第118-119页 |
| 5.2.4 敲除淀粉酶Amy15A获得较干净的蛋白表达背景 | 第119-120页 |
| 5.2.5 纤维二糖水解酶CBHI以及内切葡聚糖酶EGI在A11△中的重组表达 | 第120-121页 |
| 本章小结 | 第121-123页 |
| 论文创新性结果总结与展望 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-149页 |
| 攻读学位期间已(待)发表的学术论文 | 第149-151页 |
| 致谢 | 第151-152页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第152页 |
