| 符号说明 | 第5-11页 |
| 中文摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 引言 | 第16-41页 |
| 1.1 干旱胁迫对植物及农业的危害 | 第16-17页 |
| 1.2 植物应答干旱胁迫的机制 | 第17-23页 |
| 1.2.1 植物避旱机制 | 第18-21页 |
| 1.2.1.1 根系结构调整 | 第18-19页 |
| 1.2.1.2 叶片变化 | 第19-20页 |
| 1.2.1.3 光合作用 | 第20-21页 |
| 1.2.2 植物耐旱机制 | 第21-23页 |
| 1.2.2.1 渗透调节 | 第21-22页 |
| 1.2.2.2 氧化还原调节 | 第22-23页 |
| 1.2.2.3 激素调节 | 第23页 |
| 1.2.2.4 叶绿素含量调节 | 第23页 |
| 1.3 ABA与植物干旱胁迫响应 | 第23-34页 |
| 1.3.1 ABA的合成与代谢 | 第24-26页 |
| 1.3.2 ABA信号 | 第26-30页 |
| 1.3.2.1 ABA受体 | 第26-27页 |
| 1.3.2.2 PP2C蛋白磷酸酶 | 第27-28页 |
| 1.3.2.3 SnRK2蛋白激酶 | 第28-29页 |
| 1.3.2.4 ABA核心信号途径 | 第29-30页 |
| 1.3.3 ABA在植物干旱胁迫响应过程中的作用 | 第30-34页 |
| 1.3.3.1 ABA依赖的干旱胁迫调控机制 | 第31-32页 |
| 1.3.3.2 ABA不依赖的干旱胁迫调控机制 | 第32-34页 |
| 1.4 MAPK级联途径 | 第34-40页 |
| 1.4.1 植物体内的MAPK级联途径 | 第34-36页 |
| 1.4.2 MAPK级联途径在植物生长发育过程中的作用 | 第36页 |
| 1.4.3 MAPK级联途径在植物非生物胁迫响应过程中的作用 | 第36-38页 |
| 1.4.3.1 MAPK级联途径参与植物干旱胁迫响应 | 第36-37页 |
| 1.4.3.2 MAPK级联途径参与植物其他非生物胁迫响应 | 第37-38页 |
| 1.4.4 MAPK级联途径在植物ABA信号通路中的作用 | 第38-40页 |
| 1.4.4.1 ABA调节拟南芥MAPK级联组分的表达和激活 | 第38-39页 |
| 1.4.4.2 MAPK级联途径介导保卫细胞中的ABA信号通路 | 第39-40页 |
| 1.5 本课题的目的和意义 | 第40-41页 |
| 2 材料与方法 | 第41-68页 |
| 2.1 材料 | 第41-45页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第41页 |
| 2.1.2 载体与菌株 | 第41页 |
| 2.1.3 其它材料 | 第41-42页 |
| 2.1.4 实验引物 | 第42-45页 |
| 2.2 实验方法 | 第45-68页 |
| 2.2.1 CTAB法提取拟南芥基因组DNA | 第45-46页 |
| 2.2.2 植物基因组的纯化 | 第46页 |
| 2.2.3 RNA的提取 | 第46-47页 |
| 2.2.3.1 利用TRIZOL法提取拟南芥总RNA | 第46-47页 |
| 2.2.3.2 RNA中基因组DNA的去除 | 第47页 |
| 2.2.3.3 RNA反转录 | 第47页 |
| 2.2.4 DNA片段的扩增与载体的构建 | 第47-49页 |
| 2.2.4.1 DNA片段的扩增 | 第47-48页 |
| 2.2.4.2 平末端片段加A反应 | 第48页 |
| 2.2.4.3 连接反应 | 第48页 |
| 2.2.4.4 酶切反应 | 第48-49页 |
| 2.2.4.5 小量碱法提取大肠杆菌中的质粒 | 第49页 |
| 2.2.5 大肠杆菌DH5α 感受态的制备及转化 | 第49-50页 |
| 2.2.5.1 大肠杆菌DH5α 感受态的制备 | 第49-50页 |
| 2.2.5.2 大肠杆菌细胞的转化 | 第50页 |
| 2.2.6 农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第50-51页 |
| 2.2.6.1 根癌农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第50页 |
| 2.2.6.2 农杆菌的转化 | 第50-51页 |
| 2.2.7 拟南芥的转化及转基因鉴定 | 第51-52页 |
| 2.2.7.1 农杆菌介导的花序浸染法 | 第51页 |
| 2.2.7.2 转基因拟南芥的鉴定 | 第51-52页 |
| 2.2.8 转基因拟南芥的GUS组织化学染色分析 | 第52页 |
| 2.2.9 农杆菌介导的烟草瞬时转化 | 第52-53页 |
| 2.2.10 免疫印迹 | 第53-58页 |
| 2.2.10.1 植物蛋白的提取 | 第53页 |
| 2.2.10.2 蛋白质浓度检测 | 第53-54页 |
| 2.2.10.3 试剂配制 | 第54-56页 |
| 2.2.10.4 蛋白质凝胶电泳 | 第56-57页 |
| 2.2.10.5 湿法蛋白转移 | 第57-58页 |
| 2.2.10.6 免疫反应及化学发光法检测蛋白含量 | 第58页 |
| 2.2.11 拟南芥细胞质和细胞核的分离 | 第58-60页 |
| 2.2.12 醋酸锂法制备并转化酵母感受态细胞 | 第60页 |
| 2.2.12.1 LiAc法制备酵母感受态细胞 | 第60页 |
| 2.2.12.2 小量法酵母转化 | 第60页 |
| 2.2.13 激酶活性检测 | 第60-62页 |
| 2.2.13.1 原核表达 | 第60-61页 |
| 2.2.13.2 His标签蛋白纯化 | 第61页 |
| 2.2.13.3 体外激酶活性检测 | 第61-62页 |
| 2.2.14 免疫共沉淀 | 第62-63页 |
| 2.2.15 染色质免疫共沉淀 | 第63-68页 |
| 2.2.15.1 试剂配置 | 第63-65页 |
| 2.2.15.2 染色质交联 | 第65页 |
| 2.2.15.3 染色质准备 | 第65-66页 |
| 2.2.15.4 抗原抗体免疫反应 | 第66页 |
| 2.2.15.5 洗脱和逆交联 | 第66-67页 |
| 2.2.15.6 DNA的回收与纯化 | 第67-68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-96页 |
| 3.1 拟南芥MAPKKK18功能缺失突变体成苗表型分析 | 第68-70页 |
| 3.1.1 MAPKKK18功能缺失突变体鉴定 | 第68-69页 |
| 3.1.1.1 纯合突变体筛选 | 第68页 |
| 3.1.1.2 mapkkk18突变体中MAPKKK18表达量分析 | 第68-69页 |
| 3.1.2 mapkkk18突变体成苗的干旱胁迫表型分析 | 第69-70页 |
| 3.2 拟南芥MAPKKK18超表达株系成苗表型分析 | 第70-72页 |
| 3.2.1 MAPKKK18超表达转基因株系的获得 | 第70页 |
| 3.2.2 MAPKKK18超表达株系成苗的干旱胁迫表型分析 | 第70-72页 |
| 3.3 MAPKKK18参与拟南芥干旱胁迫响应 | 第72-74页 |
| 3.4 MAPKKK18表达模式分析 | 第74-78页 |
| 3.4.1 MAPKKK18组织表达模式分析 | 第74页 |
| 3.4.2 MAPKKK18诱导表达模式分析 | 第74-77页 |
| 3.4.3 MAPKKK18的表达依赖内源ABA合成及ABA信号通路 | 第77-78页 |
| 3.5 MAPKKK18蛋白亚细胞定位分析 | 第78-79页 |
| 3.6 MAPKKK18与MAPKKs的蛋白互作分析 | 第79-82页 |
| 3.6.1 MAPKKK18与MAPKK3互作 | 第79-80页 |
| 3.6.2 MAPKKK18磷酸化MAPKK3 | 第80-82页 |
| 3.7 MAPKK3正调控拟南芥干旱胁迫响应过程 | 第82-86页 |
| 3.7.1 MAPKK3组织表达模式分析 | 第82页 |
| 3.7.2 MAPKK3诱导表达模式分析 | 第82-83页 |
| 3.7.3 MAPKK3蛋白亚细胞定位分析 | 第83-84页 |
| 3.7.4 MAPKK3功能缺失突变体及超表达株系成苗表型分析 | 第84-86页 |
| 3.7.4.1 mapkk3纯合突变体筛选 | 第84页 |
| 3.7.4.2 MAPKK3超表达株系及突变体成苗干旱胁迫表型分析 | 第84-86页 |
| 3.8 MAPKK3与MAPKs的蛋白互作分析 | 第86-87页 |
| 3.9 MAPKKK18介导非经典ABA响应过程 | 第87-91页 |
| 3.9.1 MAPKKK18负调控ABA对种子萌发的抑制作用 | 第87-89页 |
| 3.9.2 MAPKKK18正调控ABA对幼苗根长的抑制作用 | 第89-90页 |
| 3.9.3 MAPKKK18不调控已知ABA响应基因 | 第90-91页 |
| 3.10 MAPKKK18的转录激活受ABI4与ABI5调控 | 第91-96页 |
| 3.10.1 ABI4与ABI5增强胁迫条件下MAPKKK18的表达 | 第91-92页 |
| 3.10.2 ABI4与ABI5体外激活MAPKKK18的转录 | 第92-94页 |
| 3.10.3 ABI4与ABI5靶向MAPKKK18启动子 | 第94-96页 |
| 4 讨论 | 第96-100页 |
| 5 结论 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第122页 |
