| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 1 引言 | 第9-15页 |
| 1.1 山羊痒病的研究现状 | 第9-10页 |
| 1.2 PRNP基因研究现状 | 第10-13页 |
| 1.2.1 PRNP基因作用机理 | 第10-12页 |
| 1.2.2 PRNP基因与痒病 | 第12-13页 |
| 1.3 启动子的研究方法 | 第13-14页 |
| 1.3.1 启动子的结构 | 第13页 |
| 1.3.2 启动子功能分析方法 | 第13-14页 |
| 1.3.3 启动子的生物信息学分析 | 第14页 |
| 1.4 本研究的主要内容和意义 | 第14-15页 |
| 1.4.1 主要内容 | 第14页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第14-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-28页 |
| 2.1 材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1 材料样品及来源 | 第15-16页 |
| 2.1.2 试剂来源及配置方法 | 第16-17页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.1.4 数据分析软件 | 第18页 |
| 2.2 方法 | 第18-25页 |
| 2.2.1 山羊基因组的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 转录因子结合位点分析 | 第19页 |
| 2.2.3 引物设计 | 第19-23页 |
| 2.2.4 重组载体构建 | 第23-25页 |
| 2.3 细胞培养及转染 | 第25-27页 |
| 2.3.1 SH-SY5Y细胞的培养 | 第25-26页 |
| 2.3.2 细胞转染 | 第26-27页 |
| 2.4 Luc报告基因活性检测 | 第27-28页 |
| 2.4.1 检测步骤 | 第27页 |
| 2.4.2 数据处理 | 第27-28页 |
| 3 结果与分析 | 第28-42页 |
| 3.1 PRNP基因启动子生物信息学分析 | 第28-31页 |
| 3.1.1 PRNP基因位置及序列的确定 | 第28页 |
| 3.1.2 同源序列分析 | 第28-29页 |
| 3.1.3 Mcpromoter程序的启动子预测结果 | 第29页 |
| 3.1.4 Promoter 2.0 程序启动子预测结果 | 第29-30页 |
| 3.1.5 NNPP启动子程序的预测结果 | 第30页 |
| 3.1.6 Cp G岛的预测分析 | 第30-31页 |
| 3.2 基因组DNA的提取结果 | 第31-32页 |
| 3.3 山羊PRNP基因内含子和启动子序列的获得 | 第32页 |
| 3.4 PCR鉴定 | 第32-35页 |
| 3.5 重组质粒酶切鉴定 | 第35-37页 |
| 3.6 细胞转染 | 第37-42页 |
| 3.6.1 SH-SY5Y细胞的培养 | 第37页 |
| 3.6.2 最佳转染效率的确定 | 第37-39页 |
| 3.6.3 山羊PRNP基因内含子1片段活性分析 | 第39页 |
| 3.6.4 山羊PRNP基因启动子首轮缺失片段活性分析 | 第39页 |
| 3.6.5 山羊PRNP基因启动子二次缺失片段活性分析 | 第39-40页 |
| 3.6.6 山羊PRNP基因内含子1缺失突变的活性分析 | 第40页 |
| 3.6.7 山羊PRNP基因核心启动子区转录因子结合位点分析 | 第40-41页 |
| 3.6.8 山羊PRNP基因内含子1缺失片段的转录因子结合位点分析 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| 4.1 实验过程讨论 | 第42-43页 |
| 4.1.1 转录因子结合位点分析 | 第42页 |
| 4.1.2 PCR扩增条件掌控 | 第42-43页 |
| 4.1.3 重组质粒的构建 | 第43页 |
| 4.1.4 细胞培养 | 第43页 |
| 4.2 实验结果讨论 | 第43-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第50-51页 |
| 作者简历 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
