英文缩略词 | 第6-7页 |
中文摘要 | 第7-9页 |
英文摘要 | 第9-10页 |
前言 | 第11-13页 |
第一部分 hsa-miR-181a在人ALL中的表达及临床意义 | 第13-26页 |
1 材料 | 第13-14页 |
1.1 细胞株及培养条件 | 第13页 |
1.2 临床标本的收集与分组 | 第13-14页 |
1.3 主要试剂 | 第14页 |
1.4 主要仪器 | 第14页 |
2 方法 | 第14-18页 |
2.1 细胞复苏、培养与传代 | 第14-15页 |
2.2 临床标本骨髓单个核细胞的分离 | 第15-16页 |
2.3 细胞总RNA抽提(TRIzol法) | 第16页 |
2.4 cDNA第一链合成 | 第16页 |
2.5 Taqman探 针荧光定量PCR检 测hsa-mi R-181a的 表达水平 | 第16-17页 |
2.6 ALL患者随访与临床生物学特性的分析 | 第17-18页 |
3 统计学分析 | 第18-19页 |
结果 | 第19-24页 |
1 hsa-miR-181a在四种急性淋巴细胞白血病细胞株中的表达 | 第19页 |
2 hsa-miR-181a在ALL患者和正常骨髓单个核细胞表达情况 | 第19-21页 |
3 hsa-mi R-181a 与 ALL 患者临床生物学特性的分析 | 第21-24页 |
讨论 | 第24-25页 |
小结 | 第25-26页 |
第二部分 过表达hsa-miR-181a稳定细胞株的建立 | 第26-35页 |
1 材料 | 第26页 |
1.1 细胞株 | 第26页 |
1.2 质粒 | 第26页 |
1.3 主要试剂 | 第26页 |
1.4 主要仪器 | 第26页 |
2 方法 | 第26-28页 |
2.1 293T细胞准备 | 第26-27页 |
2.2 慢病毒包装 | 第27页 |
2.3 病毒上清收集和浓缩 | 第27页 |
2.4 病毒滴度检测 | 第27-28页 |
2.5 病毒感染人急性淋巴细胞白血病细胞 | 第28页 |
2.6 hsa-miR-181a过表达效率检测 | 第28页 |
3 统计学分析 | 第28-29页 |
结果 | 第29-33页 |
1 慢病毒重组阳性穿梭质粒的鉴定及测序 | 第29-31页 |
2 慢病毒包装及滴度测定 | 第31页 |
3 Nalm-6 细胞慢病毒感染效率检测 | 第31-32页 |
4 hsa-miR-181a过表达效率检测 | 第32-33页 |
讨论 | 第33-34页 |
小结 | 第34-35页 |
第三部分hsa-miR-181a对Nalm-6 细胞增殖和凋亡的影响 | 第35-46页 |
1 材料 | 第35-36页 |
1.1 细胞系及培养条件 | 第35页 |
1.2 主要试剂 | 第35-36页 |
1.3 主要仪器 | 第36页 |
2 方法 | 第36-39页 |
2.1 生物信息学方法筛选靶基因 | 第36页 |
2.2 CCK-8 法检测hsa-miR-181a对Nalm-6 细胞增殖的影响 | 第36-37页 |
2.3 Real-time PCR检测过表达hsa-mi R-181a前后凋亡相关靶基因Bcl-2 表达的改变 | 第37页 |
2.4 Western Blot检测过表达hsa-mi R-181a前后细胞凋亡靶蛋白Bcl-2 的改变 | 第37-39页 |
2.5 Western Blot检测过表达hsa-miR-181a前后凋亡相关蛋白表达的改变 | 第39页 |
3 统计学分析 | 第39-40页 |
结果 | 第40-43页 |
1 生物信息学方法筛选靶基因 | 第40页 |
2 过表达hsa-miR-181a抑制Nalm-6 细胞增殖 | 第40-41页 |
3 过表达hsa-miR-181a促进Nalm-6 细胞caspase-3 和caspase-9的活化 | 第41-43页 |
讨论 | 第43-45页 |
小结 | 第45-46页 |
结论 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-50页 |
综述 | 第50-61页 |
参考文献 | 第57-61页 |
致谢 | 第61页 |