| 中文摘要 | 第12-15页 |
| ABSTRACT | 第15-19页 |
| 第一章 前言 | 第20-38页 |
| 1.1 羧酸酯酶的功能及分类 | 第20-22页 |
| 1.1.1 羧酸酯酶的功能 | 第20页 |
| 1.1.2 羧酸酯酶的分类 | 第20-22页 |
| 1.2 羧酸酯酶的研究进展 | 第22-28页 |
| 1.2.1 哺乳动物羧酸酯酶的研究概况 | 第22-23页 |
| 1.2.2 昆虫CarEs的研究概况 | 第23-28页 |
| 1.3 RNA干扰原理及应用 | 第28-31页 |
| 1.4 转基因果蝇 | 第31-32页 |
| 1.5 飞蝗概述 | 第32-35页 |
| 1.5.1 飞蝗生活习性和分类 | 第32-33页 |
| 1.5.2 飞蝗为害及防治 | 第33-34页 |
| 1.5.3 飞蝗研究进展 | 第34-35页 |
| 1.6 本文立题依据及主要研究内容 | 第35-38页 |
| 第二章 飞蝗CarE基因cDNA序列的转录组分析 | 第38-52页 |
| 2.1 研究方法 | 第38-39页 |
| 2.1.1 飞蝗转录组数据库中羧酸酯酶家族基因cDNA序列的搜索 | 第38页 |
| 2.1.2 飞蝗CarE基因cDNA推导的氨基酸序列分析 | 第38-39页 |
| 2.1.3 飞蝗羧酸酯酶NJ聚类分析 | 第39页 |
| 2.2 结果与分析 | 第39-49页 |
| 2.2.1 飞蝗CarE基因的鉴定和系统发育研究 | 第39-41页 |
| 2.2.2 飞蝗CarE基因分子特性分析 | 第41-49页 |
| 2.3 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 飞蝗CarE基因的发育表达和组织部位表达研究 | 第52-68页 |
| 3.1 研究材料与仪器 | 第52-53页 |
| 3.1.1 飞蝗 | 第52页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第52-53页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第53页 |
| 3.2 研究方法 | 第53-59页 |
| 3.2.1 飞蝗CarE基因cDNA序列的克隆验证 | 第53-55页 |
| 3.2.2 飞蝗CarE基因不同龄期和不同组织部位的表达分析 | 第55-57页 |
| 3.2.3 飞蝗CarE基因的原位杂交 | 第57-59页 |
| 3.3 结果与分析 | 第59-65页 |
| 3.3.1 飞蝗CarE基因的全长cDNA扩增及测序 | 第59-60页 |
| 3.3.2 飞蝗CarE基因不同龄期mRNA表达 | 第60页 |
| 3.3.3 飞蝗CarE基因不同组织部位的mRNA表达 | 第60-61页 |
| 3.3.4 飞蝗CarE基因原位杂交 | 第61-65页 |
| 3.4 讨论 | 第65-68页 |
| 第四章 溴氰菊酯对飞蝗CarE基因表达的影响 | 第68-74页 |
| 4.1 研究材料 | 第68页 |
| 4.1.1 飞蝗 | 第68页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第68页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第68页 |
| 4.2 研究方法 | 第68-69页 |
| 4.2.1 实验材料的准备 | 第68-69页 |
| 4.2.2 total RNA的提取、纯化及第一链cDNA的合成 | 第69页 |
| 4.2.3 RT-qPCR法分析溴氰菊酯对飞蝗羧酸酯酶基因表达的影响 | 第69页 |
| 4.3 结果与分析 | 第69-71页 |
| 4.3.1 不同浓度溴氰菊酯对飞蝗羧酸酯酶基因mRNA表达水平的影响 | 第69-70页 |
| 4.3.2 溴氰菊酯处理飞蝗不同时间后羧酸酯酶基因mRNA表达水平分析 | 第70-71页 |
| 4.4 讨论 | 第71-74页 |
| 第五章 飞蝗CarE基因的杀虫剂解毒功能研究 | 第74-84页 |
| 5.1 研究材料 | 第74-75页 |
| 5.1.1 飞蝗 | 第74页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第74-75页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第75页 |
| 5.2 研究方法 | 第75-78页 |
| 5.2.1 dsRNA引物设计及PCR扩增 | 第75页 |
| 5.2.2 dsRNA的体外合成 | 第75-76页 |
| 5.2.3 飞蝗CarE基因沉默效率检测 | 第76-77页 |
| 5.2.4 飞蝗CarE基因沉默后飞蝗对杀虫剂的敏感性分析 | 第77-78页 |
| 5.3 结果与分析 | 第78-81页 |
| 5.3.1 飞蝗CarE基因RNAi沉默效率的检测 | 第78页 |
| 5.3.2 飞蝗CarE基因沉默后飞蝗对杀虫剂的敏感性分析 | 第78-81页 |
| 5.4 讨论 | 第81-84页 |
| 第六章 转基因果蝇的构建及对杀虫剂敏感性研究 | 第84-92页 |
| 6.1 研究材料 | 第84-86页 |
| 6.1.1 果蝇品系 | 第84页 |
| 6.1.2 质粒与载体 | 第84-85页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第85-86页 |
| 6.1.4 主要仪器 | 第86页 |
| 6.1.5 果蝇饲料 | 第86页 |
| 6.2 研究方法 | 第86-88页 |
| 6.2.1 P20-LmCesA1和P20-LmCesA2载体构建 | 第86页 |
| 6.2.2 转基因果蝇的获得 | 第86-87页 |
| 6.2.3 转基因果蝇与tub-GAL4果蝇杂交 | 第87页 |
| 6.2.4 RT-PCR法鉴定转基因果蝇 | 第87-88页 |
| 6.2.5 果蝇对不同农药的生物测定实验 | 第88页 |
| 6.3 结果与分析 | 第88-90页 |
| 6.3.1 RT-PCR法鉴定转基因果蝇 | 第88-89页 |
| 6.3.2 不同果蝇品系对杀虫剂的耐受性研究 | 第89-90页 |
| 6.4 讨论 | 第90-92页 |
| 第七章 飞蝗CarE基因的真核表达 | 第92-102页 |
| 7.1 研究材料 | 第92-93页 |
| 7.1.1 菌液,载体和sf9细胞 | 第92页 |
| 7.1.2 主要试剂 | 第92-93页 |
| 7.1.3 主要仪器 | 第93页 |
| 7.2 实验方法 | 第93-98页 |
| 7.2.1 目的基因的克隆 | 第93-94页 |
| 7.2.2 pFast Bac~(TM)-LmCesA2重组载体构建 | 第94-95页 |
| 7.2.3 重组病毒Bacmid-LmCesA2质粒的构建 | 第95-96页 |
| 7.2.4 重组Bacmid-LmCesA2质粒的提取 | 第96页 |
| 7.2.5 转染sf9细胞,获得重组蛋白 | 第96-97页 |
| 7.2.6 Western blot检测LmCesA2蛋白表达 | 第97-98页 |
| 7.3 结果与分析 | 第98-99页 |
| 7.3.1 目的基因PCR扩增结果 | 第98页 |
| 7.3.2 pFast BacTM-LmCesA2重组载体构建 | 第98页 |
| 7.3.3 重组Bacmid-LmCesA2质粒构建 | 第98-99页 |
| 7.3.4 Western blot检测LmCesA2蛋白表达 | 第99页 |
| 7.4 讨论 | 第99-102页 |
| 全文总结 | 第102-105页 |
| 参考文献 | 第105-128页 |
| 博士期间研究成果 | 第128-130页 |
| 致谢 | 第130-132页 |
| 个人简况及联系方式 | 第132-134页 |
