| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| 1.1 4-羟基异亮氨酸简介 | 第8页 |
| 1.2 4-羟基异亮氨酸的功能 | 第8-10页 |
| 1.2.1 促进胰岛素分泌，提高葡萄糖的耐受性 | 第8-9页 |
| 1.2.2 降低外周组织对于胰岛素的抵抗作用 | 第9页 |
| 1.2.3 促进脂肪代谢，调节血脂异常 | 第9-10页 |
| 1.3 4-羟基异亮氨酸制备方法 | 第10-11页 |
| 1.3.1 葫芦巴种子分离提取法 | 第10页 |
| 1.3.2 化学-酶合成法 | 第10页 |
| 1.3.3 体外两步酶合成法 | 第10-11页 |
| 1.3.4 微生物转化法 | 第11页 |
| 1.4 重组谷氨酸棒杆菌中 4-HIL合成途径及相关节点 | 第11-14页 |
| 1.4.1 谷氨酸棒杆菌中 4-HIL和L-异亮氨酸合成途径简介 | 第11-12页 |
| 1.4.2 L-异亮氨酸合成途径 | 第12-13页 |
| 1.4.3 草酰乙酸节点 | 第13-14页 |
| 1.4.4 α-酮戊二酸节点 | 第14页 |
| 1.5 立题背景与意义 | 第14-15页 |
| 1.6 本论文主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第16-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-19页 |
| 2.1.1 实验菌株和质粒 | 第16-17页 |
| 2.1.2 实验主要引物 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.5 主要培养基和菌株的培养条件 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-26页 |
| 2.2.1 基本分子操作 | 第19-20页 |
| 2.2.2 ppc和lysC过表达质粒的构建 | 第20-22页 |
| 2.2.3 pknG敲除菌株的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.4 重组谷氨酸棒杆菌的构建 | 第24页 |
| 2.2.5 重组菌株的摇瓶发酵 | 第24页 |
| 2.2.6 OD_(562)、残糖、pH等发酵参数的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.7 氨基酸含量的测定 | 第25页 |
| 2.2.8 谷氨酸棒杆菌中IDO酶活的测定 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-42页 |
| 3.1 谷氨酸棒杆菌重组菌株的构建 | 第26-30页 |
| 3.1.1 表达质粒的构建 | 第26-28页 |
| 3.1.2 pknG敲除菌株的构建 | 第28-29页 |
| 3.1.3 重组谷氨酸棒杆菌的构建 | 第29-30页 |
| 3.2 lysC过表达对 4-HIL摇瓶发酵的影响 | 第30-32页 |
| 3.2.1 lysC的过表达对菌株的生长和耗糖的影响 | 第30-31页 |
| 3.2.2 lysC过表达对菌株的 4-HIL产量的影响 | 第31-32页 |
| 3.3 ppc过表达对 4-HIL摇瓶发酵的影响 | 第32-35页 |
| 3.3.1 Cgl/p4菌株和Cgl/p4-ppc菌株的L-异亮氨酸发酵 | 第32-33页 |
| 3.3.2 ppc过表达对 4-HIL发酵的影响 | 第33-35页 |
| 3.4 ppc和lysC的共表达对 4-HIL发酵的影响 | 第35-38页 |
| 3.4.1 ppc和lysC的共表达对菌株的生长和耗糖的影响 | 第35页 |
| 3.4.2 ppc和lysC的共表达对菌株的 4-HIL生产能力的影响 | 第35-36页 |
| 3.4.3 对发酵过程中出现的Ile向 4-HIL转化率较低问题的初步探究 | 第36-38页 |
| 3.5 pknG敲除对 4-HIL摇瓶发酵的影响 | 第38-42页 |
| 3.5.1 pknG敲除对Ile代谢的影响 | 第39页 |
| 3.5.2 pknG敲除菌株的 4-HIL摇瓶发酵 | 第39-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| 主要结论 | 第42页 |
| 展望 | 第42-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第49页 |
