中文摘要 | 第4-5页 |
abstract | 第5-6页 |
引言 | 第12-13页 |
第一篇 文献综述 | 第13-19页 |
1. 中和抗体的概述 | 第13-14页 |
2. 猪免疫球蛋白 | 第14-17页 |
2.1 猪免疫球蛋白基本结构 | 第14页 |
2.2 猪免疫球蛋白的重排机制 | 第14-15页 |
2.3 猪免疫球蛋白编码基因 | 第15-17页 |
3. 猪瘟的简介 | 第17-19页 |
第二篇 研究内容 | 第19-54页 |
第1章 猪不同发育阶段Ig谱的分析 | 第19-37页 |
1.1 材料 | 第19-21页 |
1.1.1 实验动物 | 第19页 |
1.1.2 实验材料与试剂 | 第19-20页 |
1.1.3 实验设备 | 第20-21页 |
1.2 实验方法 | 第21-29页 |
1.2.1 血液样品的采集 | 第21页 |
1.2.2 分离猪外周血单核细胞 | 第21页 |
1.2.3 猪外周血单核细胞总RNA的提取 | 第21-22页 |
1.2.4 猪外周血单核细胞cDNA的制备 | 第22-23页 |
1.2.5 Ig基因引物的设计和合成 | 第23-24页 |
1.2.6 IGH,IGK和IGL基因的扩增 | 第24-25页 |
1.2.7 IGH,IGK和IGL基因的克隆和测序 | 第25-26页 |
1.2.8 IGHV-D-J组成特征 | 第26-29页 |
1.3 结果 | 第29-34页 |
1.3.1 猪IGH基因分布 | 第29-30页 |
1.3.2 猪IGK基因分布 | 第30-31页 |
1.3.3 猪IGL基因分布 | 第31-32页 |
1.3.4 IGHV-D-J组成特征 | 第32-34页 |
1.4 讨论 | 第34-36页 |
1.5 小结 | 第36-37页 |
第2章 猪瘟病毒抗体基因的初步筛选 | 第37-54页 |
2.1 实验动物 | 第37页 |
2.2 材料 | 第37-38页 |
2.2.1 主要试剂 | 第37页 |
2.2.2 实验设备 | 第37-38页 |
2.3 实验方法 | 第38-46页 |
2.3.1 猪血清中的猪瘟病毒抗体检测 | 第38页 |
2.3.2 中和试验 | 第38页 |
2.3.3 分离猪外周血单核细胞 | 第38页 |
2.3.4 猪瘟病毒中和表位的合成 | 第38-39页 |
2.3.5 流式细胞分选术分选猪瘟病毒抗体分泌细胞 | 第39页 |
2.3.6 利用Smart-seq2获得单细胞RNA-seq | 第39-41页 |
2.3.7 单细胞RNA-seq质量检测 | 第41-42页 |
2.3.8 Ig抗体基因的获得 | 第42页 |
2.3.9 Ig基因克隆和测序分析 | 第42页 |
2.3.10 猪瘟病毒抗体基因重组载体构建 | 第42-44页 |
2.3.11 抗体基因的真核表达 | 第44-46页 |
2.4 实验结果 | 第46-52页 |
2.4.1 猪瘟病毒抗体效价检测 | 第46页 |
2.4.2 猪血清中猪瘟病毒抗体的中和效价检测 | 第46-47页 |
2.4.3 流式细胞术分选猪瘟病毒抗体分泌细胞 | 第47-48页 |
2.4.4 单细胞cDNA质量检测 | 第48页 |
2.4.5 单细胞的重链-轻链的基因扩增 | 第48-49页 |
2.4.6 重组表达载体EF1α-IGH-WPRE、EF1α-IGK-WPRE的构建与鉴定 | 第49-51页 |
2.4.7 高频的配对IGH-IGK重组蛋白的表达 | 第51-52页 |
2.5 讨论 | 第52-53页 |
2.6 小结 | 第53-54页 |
结论 | 第54-55页 |
参考文献 | 第55-61页 |
导师简介 | 第61-62页 |
作者简介及攻读硕士学位期间发表的学术论文及其他成果 | 第62-63页 |
致谢 | 第63页 |