| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 氨基酸缩略词表 | 第9-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 缩略词表 续 | 第11-16页 |
| 1 引言 | 第16-30页 |
| 1.1 抗菌肽的概述 | 第16-19页 |
| 1.1.1 抗菌肽的发现 | 第16-17页 |
| 1.1.2 来源及分类 | 第17页 |
| 1.1.3 抗菌肽的结构特征和抗菌机理 | 第17-18页 |
| 1.1.4 抗菌肽数据库 | 第18-19页 |
| 1.2 抗菌肽的基因工程研究 | 第19-24页 |
| 1.2.1 原核表达 | 第20-22页 |
| 1.2.2 真核表达系统 | 第22-24页 |
| 1.2.3 其他蛋白质表达系统 | 第24页 |
| 1.3 抗菌肽的应用价值 | 第24-26页 |
| 1.3.1 抗菌肽在医药领域的应用 | 第24页 |
| 1.3.2 抗菌肽在食品方面的应用 | 第24-25页 |
| 1.3.3 抗菌肽在畜牧业方面的应用 | 第25-26页 |
| 1.3.4 抗菌肽在转基因动植物方面的应用 | 第26页 |
| 1.4 母体肽的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.4.1 蛙皮素的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.4.2 死亡素的研究进展 | 第27页 |
| 1.5 课题的提出的意义、研究内容及技术路线 | 第27-30页 |
| 1.5.1 本课题的意义 | 第27-28页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第28-29页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第29-30页 |
| 2 杂合抗菌肽MT基因序列设计 | 第30-35页 |
| 2.1 材料及方法 | 第30-31页 |
| 2.1.1 材料 | 第30页 |
| 2.1.2 生物信息学工具及方法 | 第30-31页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第31-34页 |
| 2.2.1 MT的基因序列设计 | 第31页 |
| 2.2.2 MT的生物信息学分析 | 第31-34页 |
| 2.2.3 讨论 | 第34页 |
| 2.3 小结 | 第34-35页 |
| 3 杂合抗菌肽MT基因的合成及原核表达载体的构建 | 第35-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 3.1.1 材料 | 第35-37页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第37页 |
| 3.2 MT基因的克隆 | 第37-39页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第37-38页 |
| 3.2.2 基因合成 | 第38-39页 |
| 3.3 表达载体的构建 | 第39-45页 |
| 3.3.1 构建路线 | 第39-40页 |
| 3.3.2 pGEX-6P-1质粒的提取 | 第40-41页 |
| 3.3.3 MT基因片段与pGEX-6P-1质粒的纯化 | 第41-42页 |
| 3.3.4 MT基因片段和pGEX-6P-1质粒的双酶切 | 第42页 |
| 3.3.5 重组质粒转化E.coli DH5α | 第42-44页 |
| 3.3.6 重组质粒的菌落PCR验证 | 第44页 |
| 3.3.7 重组质粒pGEX-6P1MT的双酶切验证 | 第44-45页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第45-48页 |
| 3.4.1 MT基因的合成 | 第45页 |
| 3.4.2 pGEX-6P-1质粒的提取 | 第45-46页 |
| 3.4.3 MT基因片段与pGEX-6P-1质粒的双酶切 | 第46页 |
| 3.4.4 重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第46-47页 |
| 3.4.5 pGEX-6P1MT质粒的双酶切验证 | 第47页 |
| 3.4.6 讨论 | 第47-48页 |
| 3.5 小结 | 第48-49页 |
| 4 杂合抗菌肽在大肠杆菌中的融合表达与纯化 | 第49-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第49-51页 |
| 4.1.1 材料 | 第49-51页 |
| 4.1.2 实验仪器设备 | 第51页 |
| 4.2 pGEX-6P1MT质粒转化感受态细胞 | 第51页 |
| 4.3 重组质粒的菌落PCR验证 | 第51-52页 |
| 4.4 杂合抗菌肽的诱导表达 | 第52-57页 |
| 4.4.1 重组蛋白的小量表达 | 第52页 |
| 4.4.2 SDS-PAGE检测融合蛋白 | 第52-53页 |
| 4.4.3 表达产物的可溶性分析 | 第53页 |
| 4.4.4 杂合抗菌肽MT的Western blot分析 | 第53-54页 |
| 4.4.5 杂合抗菌肽MT的纯化 | 第54-55页 |
| 4.4.6 杂合抗菌肽MT的切割 | 第55-56页 |
| 4.4.7 浓度的测定 | 第56-57页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第57-60页 |
| 4.5.1 重组质粒的菌落PCR验证 | 第57页 |
| 4.5.2 重组蛋白的小量表达 | 第57页 |
| 4.5.3 表达产物的可溶性分析 | 第57-58页 |
| 4.5.4 杂合抗菌肽MT的Western blot分析 | 第58-59页 |
| 4.5.5 纯化的杂合抗菌肽MT融合蛋白的SDS-PAGE分析 | 第59页 |
| 4.5.6 杂合抗菌肽MT的切割 | 第59-60页 |
| 4.5.7 蛋白浓度的测定 | 第60页 |
| 4.5.8 讨论 | 第60页 |
| 4.6 小结 | 第60-62页 |
| 5 杂合抗菌肽MT的诱导表达条件优化 | 第62-69页 |
| 5.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 5.1.1 材料 | 第62-63页 |
| 5.1.2 实验仪器及设备 | 第63页 |
| 5.2 表达条件的优化 | 第63-64页 |
| 5.2.1 杂合抗菌肽重组表达菌株生长曲线的测定 | 第63页 |
| 5.2.2 IPTG浓度对MT重组工程菌表达的影响 | 第63页 |
| 5.2.3 诱导时间对MT重组工程菌表达的影响 | 第63-64页 |
| 5.2.4 诱导温度对MT重组工程菌表达的影响 | 第64页 |
| 5.2.5 培养基对MT重组工程菌表达的影响 | 第64页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第64-68页 |
| 5.3.1 杂合抗菌肽重组表达菌株生长曲线的测定 | 第64-65页 |
| 5.3.2 IPTG浓度对MT重组工程菌表达的影响 | 第65-66页 |
| 5.3.3 诱导时间对MT重组工程菌表达的影响 | 第66页 |
| 5.3.4 诱导温度对MT重组工程菌表达的影响 | 第66-67页 |
| 5.3.5 培养基对MT重组工程菌表达的影响 | 第67页 |
| 5.3.6 讨论 | 第67-68页 |
| 5.4 小结 | 第68-69页 |
| 6 杂合抗菌肽MT的活性研究 | 第69-73页 |
| 6.1 研究材料 | 第69页 |
| 6.1.1 材料 | 第69页 |
| 6.1.2 仪器设备 | 第69页 |
| 6.2 杂合抗菌肽MT的抗菌活性检测 | 第69-70页 |
| 6.2.1 抑菌圈法检测杂合抗菌肽MT的抗菌活性 | 第69-70页 |
| 6.2.2 最小抑菌浓度测定 | 第70页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第70-71页 |
| 6.3.1 抑菌圈法检测杂合抗菌肽MT的抗菌活性 | 第70页 |
| 6.3.2 最小抑菌浓度测定 | 第70-71页 |
| 6.3.3 讨论 | 第71页 |
| 6.4 小结 | 第71-73页 |
| 7 论文总结 | 第73-75页 |
| 7.1 结论 | 第73页 |
| 7.2 创新点 | 第73页 |
| 7.3 展望 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-84页 |
| 附录A：pGEX-6P-1质粒图谱 | 第84-87页 |
| 附录B：pGEX-6P1MT序列 | 第87-90页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第90-92页 |
