| Abstract | 第6-7页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abbreviations | 第11-12页 |
| Chapter Ⅰ A brief review about CRISPR/Cas9 system and its applications as abiotechnology tool | 第12-59页 |
| 1.1 Background of CRISPR/Cas systems | 第13-24页 |
| 1.1.1 History of CRISPR/Cas research | 第13-14页 |
| 1.1.2 Common features of CRISPR/Cas systems | 第14-17页 |
| 1.1.3 Classification of CRISPR/Cas systems | 第17-22页 |
| 1.1.4 Milestone of CRISPR/Cas9 research | 第22-24页 |
| 1.2 Principles and methodology for genome editing by CRISPR/Cas9 | 第24-41页 |
| 1.2.1 Principle for KO and KI by Cas9 nucleases | 第24-25页 |
| 1.2.2 Principle for genome targeting and modification by dead Cas9 | 第25-26页 |
| 1.2.3 Methods to enhance genome editing specificity of CRISPR/Cas9 | 第26-33页 |
| 1.2.4 Methods to increase efficiency of HDR | 第33-35页 |
| 1.2.5 Comparison of ZFNs, TALENs and CRISPR/Cas9 systems | 第35-41页 |
| 1.3 Applications of CRISPR/Cas9 | 第41-47页 |
| 1.3.1 KO or KI by Cas9 nucleases in diverse species | 第41-44页 |
| 1.3.2 Somatic genome editing by Cas9 nucleases for diseases modeling | 第44-45页 |
| 1.3.3 Preclinical trials through KO endogenous genes or viral genomes by Cas9 nucleases | 第45-46页 |
| 1.3.4 Gene regulation by dCas9 | 第46-47页 |
| 1.4 Summary and perspective | 第47-48页 |
| References | 第48-59页 |
| Chapter Ⅱ Efficient generation of gene-modified pigs via injection of zygote withCas9/sgRNA and TALENs | 第59-110页 |
| 2.1 Abstract | 第60-61页 |
| 2.2 Introduction | 第61-63页 |
| 2.3 Efficient generation of Npc1l1-null pigs via injection of zygote with Cas9/sgRNA | 第63-84页 |
| 2.3.1 Introduction | 第63-64页 |
| 2.3.2 Materials and methods | 第64-68页 |
| 2.3.3 Results | 第68-82页 |
| 2.3.4 Discussion | 第82-84页 |
| 2.4 Efficient generation of B2m-null pigs via injection of zygote with TALENs | 第84-105页 |
| 2.4.1 Introduction | 第84-86页 |
| 2.4.2 Materials and methods | 第86-90页 |
| 2.4.3 Results | 第90-104页 |
| 2.4.4 Discussion | 第104-105页 |
| 2.5 Summary and discussion | 第105-106页 |
| References | 第106-110页 |
| Chapter Ⅲ Functional annotation of cis-regulatory elements in human cells bydCas9/sgRNA | 第110-137页 |
| 3.1 Abstract | 第111-112页 |
| 3.2 Introduction | 第112-113页 |
| 3.3 Materials and methods | 第113-118页 |
| 3.3.1 Reagents | 第113页 |
| 3.3.2 Vector constructs | 第113-114页 |
| 3.3.3 Antibodies | 第114页 |
| 3.3.4 Cell culture and transfection | 第114-115页 |
| 3.3.5 T7EN1 cleavage assay | 第115页 |
| 3.3.6 Luciferase activity assay | 第115页 |
| 3.3.7 RT-qPCR assay | 第115-116页 |
| 3.3.8 Chromatin Immuno-precipitation(ChIP)analyses | 第116-118页 |
| 3.4 Results | 第118-133页 |
| 3.4.1 Cis-element-specific dCas9/sgRNA works effectively against a reporter construct | 第118-123页 |
| 3.4.2 dCas9/sgRNA can effectively target endogenous cis-elements with minimal efforts of optimization | 第123-125页 |
| 3.4.3 dCas9/sgRNA can independently target cis-elements separated by short spacers and can confer multiplexed targeting | 第125-130页 |
| 3.4.4 dCas9/sgRNA-mediated cis-element targeting may proceed with considerable specificity | 第130-133页 |
| 3.5 Discussion | 第133-135页 |
| References | 第135-137页 |
| Acknowledgements | 第137-138页 |
| Publications | 第138-140页 |
