| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-15页 |
| 1 前言 | 第16-36页 |
| 1.1 虎皮病的致病机理 | 第17-23页 |
| 1.1.1 挥发性物质致病理论 | 第17-18页 |
| 1.1.2 α-法尼烯及其氧化产物致病理论 | 第18-19页 |
| 1.1.3 抗氧化系统与虎皮病 | 第19-20页 |
| 1.1.4 酚类物质与虎皮病 | 第20-21页 |
| 1.1.5 氧化胁迫与虎皮病 | 第21-22页 |
| 1.1.6 膜脂过氧化 | 第22-23页 |
| 1.2 虎皮病的控制方法 | 第23-30页 |
| 1.2.1 化学方法 | 第24-27页 |
| 1.2.2 非化学方法 | 第27-30页 |
| 1.3 α-法尼烯及AFS基因 | 第30-33页 |
| 1.3.1 α-法尼烯 | 第30-31页 |
| 1.3.2 α-法尼烯合成酶（Alpha-farnesenesynthase，AFS） | 第31-33页 |
| 1.4 α-法尼烯与乙烯调控 | 第33-34页 |
| 1.5 本课题研究的目的和意义 | 第34-36页 |
| 2 材料和方法 | 第36-55页 |
| 2.1 植物材料 | 第36页 |
| 2.2 菌株和基因型 | 第36页 |
| 2.3 本研究中用到的载体 | 第36页 |
| 2.4 PCR引物 | 第36页 |
| 2.5 酶及生化试剂 | 第36-37页 |
| 2.6 培养基 | 第37页 |
| 2.7 抗生素 | 第37页 |
| 2.8 溶液和缓冲液 | 第37-38页 |
| 2.9 生理生化指标的测定与方法 | 第38-46页 |
| 2.9.1 果实的成熟度评估 | 第38页 |
| 2.9.2 虎皮病的发病率和发病指数 | 第38-39页 |
| 2.9.3 α-法尼烯和共轭三烯含量的测定 | 第39页 |
| 2.9.4 总酚、总类黄酮、总黄酮含量的测定 | 第39-42页 |
| 2.9.5 花青素含量的测定 | 第42-43页 |
| 2.9.6 总抗氧化性的测定 | 第43页 |
| 2.9.7 抗氧化酶含量的测定 | 第43-45页 |
| 2.9.8 内源乙烯（IEC）、乙烯释放率（EPR）和呼吸速率（RR）的测定 | 第45-46页 |
| 2.10 细菌转化方法 | 第46-48页 |
| 2.10.1 根癌农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第46-47页 |
| 2.10.2 大肠杆菌DH5α感受态转化方法 | 第47-48页 |
| 2.11 植物转化方法 | 第48-49页 |
| 2.11.1 拟南芥转化 | 第48-49页 |
| 2.11.2 瞬时转化烟草叶片，双荧光素检测 | 第49页 |
| 2.12 DNA技术 | 第49-50页 |
| 2.12.1 质粒DNA的提取 （Sigma） | 第49页 |
| 2.12.2 植物DNA的提取 （Sigma） | 第49-50页 |
| 2.13 RNA提取及cDNA合成 | 第50-51页 |
| 2.13.1 RNA提取步骤（Sigma） | 第50页 |
| 2.13.2 cDNA链的合成 | 第50-51页 |
| 2.14 PcAFS1基因的克隆 | 第51-53页 |
| 2.14.1 PCR产物的回收 | 第51-52页 |
| 2.14.2 连接反应 | 第52-53页 |
| 2.14.3 DNA序列测定 | 第53页 |
| 2.14.4 序列分析 | 第53页 |
| 2.15 PcAFS1和PcMYB1启动子的克隆 | 第53页 |
| 2.16 表达载体构建 | 第53-55页 |
| 2.16.1 连接DNA的准备 | 第54页 |
| 2.16.2 PPcAFS1::lUC表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-89页 |
| 3.1 1-MCP处理对‘Anjou’梨冷藏期间的生理及贮藏效果的影响 | 第55-59页 |
| 3.1.1 1-MCP处理对‘Anjou’梨冷藏期间乙烯发生的影响 | 第55页 |
| 3.1.2 1-MCP处理对‘Anjou’梨冷藏期间的呼吸速率的影响 | 第55-56页 |
| 3.1.3 1-MCP处理对‘Anjou’梨冷藏期间的硬度的影响 | 第56-57页 |
| 3.1.4 1-MCP处理对 ‘Anjou’ 梨冷藏期间的α-法尼烯、共轭三烯和虎皮病发病率的影响 | 第57-59页 |
| 3.2 不同光照处理对‘Anjou’梨冷藏期间的生理及虎皮病发病规律的影响 | 第59-67页 |
| 3.2.1 不同光照处理的‘Anjou’梨冷藏期间的乙烯和呼吸的变化 | 第60页 |
| 3.2.2 不同光照处理的‘Anjou’梨冷藏期间的硬度、可溶性固形物和可滴定酸的变化 | 第60-61页 |
| 3.2.3 不同光照处理的‘Anjou’梨冷藏期间的α-法尼烯、共轭三烯和虎皮病的变化 | 第61-62页 |
| 3.2.4 ‘Anjou’梨冷藏后室温后熟期间的α-法尼烯和共轭三烯的变化 | 第62-64页 |
| 3.2.5 不同光照处理的‘Anjou’梨冷藏期间的总多酚、总类黄酮、总黄酮和花青素的变化 | 第64-65页 |
| 3.2.6 不同光照处理的‘Anjou’梨冷藏期间的SOD、CAT、MDAR、APX、DHAR、GR抗氧化酶活性的变化 | 第65-66页 |
| 3.2.7 不同光照处理的‘Anjou’梨冷藏期间的总抗氧化性的变化 | 第66-67页 |
| 3.3 红‘Anjou’和绿‘Anjou’梨冷藏期间的生理及虎皮病发病规律的比较 | 第67-74页 |
| 3.3.1 红‘Anjou’和绿‘Anjou’梨冷藏期间的生理及虎皮病发病规律及对 1-MCP的响应 | 第68-71页 |
| 3.3.2 红‘Anjou’和绿‘Anjou’梨冷藏期间的乙烯合成基因的变化及对 1-MCP的响应 | 第71-72页 |
| 3.3.3 红‘Anjou’和绿‘Anjou’梨冷藏期间的乙烯调控基因及对 1-MCP的响应 | 第72-73页 |
| 3.3.4 1-MCP 处理的红‘Anjou’和绿‘Anjou’梨对乙烯处理的响应 | 第73-74页 |
| 3.4 红‘Anjou’和绿‘Anjou’梨冷藏期间的抗氧化物质差异及对不同光照处理的响应 | 第74-77页 |
| 3.4.1 红‘Anjou’和绿‘Anjou’梨冷藏期间的抗氧化物质及对套袋的响应 | 第75-76页 |
| 3.4.2 红‘Anjou’和绿‘Anjou’梨冷藏期间的总抗氧化性及对套袋的响应 | 第76-77页 |
| 3.5 α-法尼烯合成酶基因（PcAFS1）的克隆和功能鉴定 | 第77-82页 |
| 3.5.1 PcAFS1的基因克隆和生物信息学分析 | 第77-80页 |
| 3.5.2 红‘Anjou’和绿‘Anjou’梨PcAFS1基因的启动子比较 | 第80页 |
| 3.5.3 PcAFS1转基因功能验证 | 第80-82页 |
| 3.6 红‘Anjou’和绿‘Anjou’梨花青素合成调控基因的比较 | 第82-89页 |
| 3.6.1 PcMYB1的基因克隆 | 第83-84页 |
| 3.6.2 PcMYB1的启动子克隆和比对 | 第84-86页 |
| 3.6.3 PcMYB1的基因组序列克隆和比对 | 第86-88页 |
| 3.6.4 pGreen0800-PcAFS1载体的构建及活性检测 | 第88-89页 |
| 4 讨论 | 第89-96页 |
| 4.1 虎皮病只在果实阴面发生 | 第89-90页 |
| 4.2 暗处理（套袋）可以增加虎皮病发病率 | 第90页 |
| 4.3 光诱导的抗氧化物质抑制了α-法尼烯的氧化过程 | 第90-92页 |
| 4.4 红‘Anjou’在果实贮藏前期虎皮病发病较绿‘Anjou’慢 | 第92-93页 |
| 4.5 PcAFS1不是造成红‘Anjou’和绿‘Anjou’虎皮病发病率差异的原因 | 第93-94页 |
| 4.6 PcMYB1在第一个内含子上的碱基缺失有可能是造成绿‘Anjou’突变为红‘Anjou’的关键原因 | 第94页 |
| 4.7 PcMYB1可以结合到PcAFS1的启动子上，促进其表达 | 第94-96页 |
| 5 结论与展望 | 第96-97页 |
| 5.1 结论 | 第96页 |
| 5.2 展望 | 第96-97页 |
| 参考文献 | 第97-110页 |
| 附录 | 第110-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第114页 |
