| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 我国家兔养殖现状概述 | 第13-14页 |
| 1.2 四个家兔品种简介 | 第14-16页 |
| 1.2.1 新西兰白兔 | 第14-15页 |
| 1.2.2 天府黑兔 | 第15页 |
| 1.2.3 伊拉配套系 | 第15-16页 |
| 1.2.4 艾哥肉兔 | 第16页 |
| 1.3 单核苷酸多态性 | 第16-17页 |
| 1.3.1 简介 | 第16-17页 |
| 1.3.2 SNP与家兔育种 | 第17页 |
| 1.4 RERG基因 | 第17-18页 |
| 1.5 TGFBR1基因 | 第18-22页 |
| 1.5.1 TGF-β家族的概述 | 第18-19页 |
| 1.5.2 TGF-β受体 | 第19-20页 |
| 1.5.3 TGF-β/Smad信号通路 | 第20-22页 |
| 1.5.4 TGFBR1 | 第22页 |
| 1.6 骨骼肌卫星细胞 | 第22-23页 |
| 1.6.1 骨骼肌卫星细胞简介 | 第22-23页 |
| 1.6.2 骨骼肌卫星细胞分化 | 第23页 |
| 1.7 研究目的及主要内容 | 第23-25页 |
| 1.7.1 本实验研究目的 | 第23-24页 |
| 1.7.2 实验主要内容 | 第24-25页 |
| 2 试验材料 | 第25-29页 |
| 2.1 试验动物选择与组织采集 | 第25页 |
| 2.2 主要设备及器材 | 第25-27页 |
| 2.2.1 分子实验主要设备仪器 | 第25-26页 |
| 2.2.2 细胞培养主要设备仪器 | 第26-27页 |
| 2.3 相关试剂及配制 | 第27-29页 |
| 2.3.1 分子实验主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.3.2 细胞培养相关试剂及配制 | 第28-29页 |
| 3 试验方法 | 第29-45页 |
| 3.1 耳组织基因组DNA提取 | 第29-30页 |
| 3.2 DNA浓度及纯度检测 | 第30-31页 |
| 3.3 RERG和TGFBR1基因引物设计、PCR扩增和SNPs检测 | 第31-34页 |
| 3.3.1 引物设计与合成 | 第31-32页 |
| 3.3.2 常规PCR反应体系及条件 | 第32-33页 |
| 3.3.3 直接测序和变异位点筛选 | 第33页 |
| 3.3.4 HRM基因分型 | 第33-34页 |
| 3.4 新西兰兔SCs分离、纯化、鉴定及培养 | 第34-38页 |
| 3.4.1 兔SCs分离及纯化 | 第34-35页 |
| 3.4.2 SCs的形态学鉴定 | 第35页 |
| 3.4.3 SCs的免疫组化染色 | 第35-36页 |
| 3.4.4 细胞传代 | 第36页 |
| 3.4.5 冷冻与复苏 | 第36-37页 |
| 3.4.6 诱导分化和HE染色 | 第37-38页 |
| 3.5 siRNA合成及转染细胞 | 第38-39页 |
| 3.5.1 siRNA的合成 | 第38页 |
| 3.5.2 有效siRNA筛选 | 第38-39页 |
| 3.5.3 siRNA转染浓度筛选 | 第39页 |
| 3.6 细胞总RNA提取和检测 | 第39-41页 |
| 3.6.1 细胞总RNA提取 | 第39-40页 |
| 3.6.2 RNA检测 | 第40-41页 |
| 3.7 细胞总RNA反转录为cDNA | 第41-42页 |
| 3.8 实时荧光定量PCR | 第42页 |
| 3.9 细胞增殖检测 | 第42-43页 |
| 3.10 数据处理 | 第43-45页 |
| 3.10.1 主要分子生物学软件 | 第43页 |
| 3.10.2 多态信息与相关性统计分析 | 第43-44页 |
| 3.10.3 qPCR组织表达研究统计分析 | 第44-45页 |
| 4 试验结果 | 第45-63页 |
| 4.1 四个家兔品种部分个体生长数据 | 第45-49页 |
| 4.2 基因组DNA提取结果 | 第49页 |
| 4.3 RERG基因遗传多态性及其与家兔生长性能的关联性分析 | 第49-54页 |
| 4.3.1 RERG基因PCR扩增 | 第49-50页 |
| 4.3.2 RERG基因PCR产物测序 | 第50-51页 |
| 4.3.3 同义突变SNPs密码子偏好性分析 | 第51页 |
| 4.3.4 RERG基因SNPs位点分型 | 第51-52页 |
| 4.3.5 RERG基因c.330G>A位点遗传多态性 | 第52-53页 |
| 4.3.6 RERG基因c.330G>A位点与家兔不同品种生长性状关联性分析 | 第53-54页 |
| 4.4 TGFBR1基因遗传多态性及其与家兔生长性能的关联性分析 | 第54-58页 |
| 4.4.1 TGFBR1基因PCR扩增 | 第54-55页 |
| 4.4.2 TGFBR1基因PCR产物测序 | 第55页 |
| 4.4.3 TGFBR1基因SNP位点分型 | 第55-56页 |
| 4.4.4 TGFBR1基因c.1264 C>A位点遗传多态性 | 第56-57页 |
| 4.4.5 TGFBR1基因c.1264 C>A位点与家兔不同品种生长性状关联性分析 | 第57-58页 |
| 4.5 TGFBR1基因对家兔骨骼肌卫星细胞生长的影响 | 第58-63页 |
| 4.5.1 SCs的形态学观察 | 第58-59页 |
| 4.5.2 家兔SCs的免疫组化染色鉴定 | 第59-60页 |
| 4.5.3 荧光鉴定siRNA转染效率 | 第60页 |
| 4.5.4 细胞总RNA提取及反转录 | 第60-61页 |
| 4.5.5 有效siRNA筛选 | 第61页 |
| 4.5.6 si-TGFBR1-01干扰最佳浓度的筛选 | 第61-62页 |
| 4.5.7 转染对TGF-β/Smad信号通路TGFB1、MSTN和Smad3基因表达的影响 | 第62-63页 |
| 4.5.8 TGFBR1对骨骼肌卫星细胞生长的影响 | 第63页 |
| 5 分析与讨论 | 第63-67页 |
| 5.1 HRM分型技术 | 第63-64页 |
| 5.2 同义突变的生物学意义 | 第64-65页 |
| 5.3 RERG基因与家兔生长性状相关性 | 第65页 |
| 5.4 TGFBR1基因与家兔生长性状相关性 | 第65-66页 |
| 5.5 TGFBR1基因对家兔骨骼肌卫星细胞生长的影响 | 第66-67页 |
| 6 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
