基于致病性丧失突变体Focr4-1366的香蕉枯萎病菌致病相关基因功能分析
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 前言 | 第11-18页 |
| ·香蕉与香蕉枯萎病 | 第11页 |
| ·香蕉枯萎病菌 | 第11-13页 |
| ·香蕉枯萎病的发生与危害 | 第11-12页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌形态与致病性分化 | 第12-13页 |
| ·香蕉枯萎病致病机制的研究 | 第13-15页 |
| ·香蕉枯萎病病原菌的入侵过程 | 第13页 |
| ·致病相关基因的研究进展 | 第13-14页 |
| ·尖孢镰刀菌毒素成分及作用机制 | 第14-15页 |
| ·香蕉枯萎病的防治 | 第15页 |
| ·香蕉枯萎病菌基因功能研研究策略 | 第15-16页 |
| ·致病相关基因的研究方法 | 第15-16页 |
| ·GFP及在研究尖孢镰刀菌致病相关基因的应用 | 第16页 |
| ·选题目的与意义 | 第16-17页 |
| ·本研究的技术路线 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-31页 |
| ·材料 | 第18-20页 |
| ·实验菌株 | 第18页 |
| ·供试香蕉苗 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18-19页 |
| ·酶液的制备 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·碱裂解法提取质粒的缓冲液 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-31页 |
| ·Foc致病性离体叶片快速测定条件优化 | 第20-21页 |
| ·Focr4的分离鉴定 | 第21-23页 |
| ·RT-PCR验证基因表达 | 第23-24页 |
| ·构建Focr4-1366失活基因的敲除载体 | 第24-27页 |
| ·突变体及互补子生物学表型观察 | 第27-29页 |
| ·互补子的获得及其生物学表型 | 第29-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-47页 |
| ·Foc离体叶片快速测定条件优化 | 第31页 |
| ·香蕉枯萎病4号生理小种强制病力菌株的分离鉴定 | 第31-35页 |
| ·分离菌株于PDA、CMA培养基上的特征 | 第31-32页 |
| ·分离菌在Komada培养基上的性状 | 第32-33页 |
| ·Foc4B的致病性测定 | 第33-34页 |
| ·分离菌Foc4B基因组DNA的提取 | 第34页 |
| ·通用引物ITS1与ITS4扩增结果及分析 | 第34-35页 |
| ·RT-PCR验证结果 | 第35-36页 |
| ·敲除转化子的筛选结果 | 第36-37页 |
| ·敲除转化子荧光显微镜下观察 | 第36页 |
| ·敲除子PCR验证 | 第36-37页 |
| ·筛选、纯化和验证互补转化子 | 第37页 |
| ·基因敲除突变体和互补子对潮霉素的敏感性测定 | 第37-39页 |
| ·敲除子与互补子致病性测定 | 第39-41页 |
| ·玻璃纸穿透实验 | 第39页 |
| ·离体叶片致病性初步测定结果 | 第39-40页 |
| ·香蕉苗根部致病性结果 | 第40-41页 |
| ·菌丝、孢子形态观察及产孢量的测定 | 第41-43页 |
| ·细胞壁降解酶降解各菌株细胞壁的结果 | 第43页 |
| ·菌落形态观察 | 第43-44页 |
| ·各菌体产毒素情况测定结果 | 第44-45页 |
| ·不同温度、PH、碳源对各菌生长的影响 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| ·Foc致病性离体叶片测定方法的优化 | 第47页 |
| ·Foc4号小种强致病性野生型菌株分离鉴定 | 第47-48页 |
| ·预测基因的RT-PCR验证 | 第48页 |
| ·转化子的分离纯化 | 第48-49页 |
| ·酶与毒素的检测 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 附录 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
