重组人生长激素(rhGH)的毕赤酵母工程菌构建、表达、分离纯化及其生物学作用研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-27页 |
| ·人生长激素简介 | 第11-14页 |
| ·人生长激素的性质 | 第11-12页 |
| ·人生长激素的作用 | 第12-14页 |
| ·重组人生长激素的临床应用 | 第14-15页 |
| ·生长激素缺乏症 | 第14页 |
| ·大面积烧伤创面愈合 | 第14-15页 |
| ·肝再生及其他作用 | 第15页 |
| ·rhGH的产业化 | 第15-17页 |
| ·外源蛋白表达系统 | 第17-26页 |
| ·原核表达系统 | 第17-18页 |
| ·酵母表达系统 | 第18-24页 |
| ·其他表达系统 | 第24-25页 |
| ·各种表达系统比较 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 2 实验材料和方法 | 第27-45页 |
| ·材料 | 第27-32页 |
| ·工程菌和表达载体 | 第27页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第27-28页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第28-31页 |
| ·主要实验仪器 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-45页 |
| ·rhGH工程菌的构建和筛选 | 第32-36页 |
| ·rhGH的小试高效表达技术建立 | 第36-38页 |
| ·rhGH的分离纯化 | 第38-40页 |
| ·rhGH的生物学作用研究 | 第40-45页 |
| 3 实验结果 | 第45-55页 |
| ·rhGH工程菌构建和筛选 | 第45-48页 |
| ·基因序列优化 | 第45页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·工程菌的筛选 | 第46-47页 |
| ·诱导表达及检测 | 第47-48页 |
| ·rhGH发酵条件优化 | 第48-49页 |
| ·1 L摇瓶发酵条件优化 | 第48-49页 |
| ·3 L发酵罐发酵条件优化 | 第49页 |
| ·rhGH的分离纯化 | 第49-51页 |
| ·双水相 | 第49-50页 |
| ·离子交换层析 | 第50-51页 |
| ·rhGH的生物学作用研究 | 第51-55页 |
| ·细胞计数法和MTT法 | 第51-52页 |
| ·BrdU染色 | 第52-53页 |
| ·Western Blotting | 第53页 |
| ·Hochest33258染色 | 第53-55页 |
| 4 讨论 | 第55-59页 |
| ·工程菌构建及筛选 | 第55页 |
| ·发酵条件优化 | 第55-56页 |
| ·分离纯化工艺研究 | 第56-57页 |
| ·生物学作用检测 | 第57-59页 |
| 5 展望 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-69页 |
| 攻读硕士学位期间参加的科研项目 | 第69-70页 |
