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棉铃虫漆酶Ⅱ基因的分子鉴定及功能分析

致谢第1-8页
摘要第8-10页
1 文献综述第10-24页
   ·昆虫体壁表皮的研究第10-13页
     ·体壁表皮的构成第10页
     ·体壁表皮的化学组分第10-12页
     ·昆虫表皮的醌鞣化第12-13页
   ·昆虫酚氧化酶的研究概况第13-19页
     ·昆虫酚氧化酶的种类第13-14页
     ·酚氧化酶的分布第14页
     ·昆虫漆酶的研究第14-19页
       ·昆虫漆酶的种类第15-16页
       ·昆虫漆酶的生化特征第16-17页
       ·昆虫漆酶在表皮中的功能第17-19页
   ·保幼激素和蜕皮激素的研究第19-24页
     ·保幼激素的研究第19-21页
       ·保幼激素的生化特征第19页
       ·保幼激素的生物合成及其类似物第19-20页
       ·保幼激素的代谢第20-21页
     ·蜕皮激素的研究第21-23页
       ·蜕皮激素的生物学特征第21页
       ·蜕皮激素的生物合成第21-22页
       ·蜕皮激素的代谢第22页
       ·蜕皮激素的作用机制及其受体 EcR、USP 的研究第22-23页
     ·保幼激素和蜕皮激素对昆虫蜕皮变态的调控第23-24页
2 前言第24-25页
3 材料与方法第25-39页
   ·供试材料第25-27页
     ·供试昆虫第25页
     ·仪器设备第25页
     ·试验试剂第25页
     ·试验中所用的主要溶液及培养基的制备第25-26页
     ·SDS-PAGE 电泳试剂第26-27页
   ·试验方法第27-39页
     ·棉铃虫 lac2 基因的克隆第27-31页
       ·棉铃虫总 RNA 提取步骤第27页
       ·反转录第27-28页
       ·引物的设计和完成第28页
       ·cDNA 片段的 PCR 扩增第28-29页
       ·PCR 产物的纯化第29页
       ·克隆载体的连接第29-30页
       ·制备感受态细胞以及转化质粒第30页
       ·质粒 DNA 提取第30-31页
       ·阳性克隆的筛选第31页
     ·第31-33页
       ·5'-RACE-Ready cDNA 的合成第31页
       ·5'-RACE cDNA 的巣式 PCR、克隆及测序第31-32页
       ·3'-RACE-Ready cDNA 的合成第32-33页
       ·3'-RACE cDNA 的巣式 PCR、克隆及测序第33页
     ·比对棉铃虫 lac2 基因氨基酸序列及构建进化树第33-34页
     ·棉铃虫 lac2 基因的时空表达分析第34-35页
       ·取样第34页
       ·引物的设计与合成第34页
       ·实时荧光定量 PCR第34-35页
     ·Methoprene 和蜕皮激素的处理第35页
     ·体外转录合成蜕皮激素受体 ECR、USP 基因 dsRNA第35-37页
       ·dsRNA 的合成第35-36页
       ·dsRNA 的注射第36-37页
     ·体外转录合成 lac2 双链 RNA第37页
       ·dsRNA 的合成第37页
       ·dsRNA 的注射第37页
     ·LAC2 的原核表达第37-39页
4 结果与分析第39-55页
   ·棉铃虫 lac2 基因 cDNA 序列分析及系统进化树第39-48页
   ·棉铃虫 lac2 基因发育表达模式第48页
   ·棉铃虫 lac2 基因组织表达模式第48-49页
   ·Methoprene 和蜕皮激素处理对棉铃虫 lac2 基因表达量的影响第49-51页
   ·蜕皮激素受体缺失对棉铃虫 lac2 基因表达的影响第51-54页
     ·RNA 干涉对 usp 和 ecr 表达的影响第51-52页
     ·蜕皮激素受体干涉对 lac2 基因表达的影响第52-54页
   ·RNA 干扰 lac2 基因对棉铃虫表皮的影响第54-55页
   ·棉铃虫 lac2 基因融合蛋白的原核表达第55页
5 结论与讨论第55-59页
参考文献第59-70页
ABSTRACT第70-73页
硕士期间发表论文第73页

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