| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-17页 |
| 参考文献 | 第14-17页 |
| 第一部分 miR-511/1297调节TRIB2基因表达抑制肺腺癌细胞的生长 | 第17-44页 |
| PartⅠ miR-511/1297对TRIB2及相关因子的调控作用 | 第17-28页 |
| 1 实验材料 | 第17-19页 |
| ·载体 | 第17页 |
| ·细胞系、组织及实验动物 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·主要仪器 | 第17-18页 |
| ·常用试剂的配制 | 第18-19页 |
| 2 实验方法 | 第19-24页 |
| ·免疫组织化学检测TRIB2在肺腺癌组织和正常肺组织中的表达 | 第19-20页 |
| ·TRIB2基因相关miRNA的预测及合成 | 第20页 |
| ·pcDNA-GFP-TRIB2-3’UTR载体的中量提取及纯化 | 第20-21页 |
| ·A549细胞的前期复苏、培养、传代、冻存与传板 | 第21页 |
| ·pcDNA-GFP-TRIB2-3’UTR载体与miRNA共转染细胞 | 第21-22页 |
| ·荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达情况 | 第22页 |
| ·Western blotting检测miRNA转染后TRIB2及下游相关因子的表达变化 | 第22-24页 |
| 3 实验结果 | 第24-28页 |
| ·免疫组织化学检测TRIB2在肺腺癌组织和正常肺组织中的表达结果 | 第24-25页 |
| ·TRIB2基因相关miRNA预测及合成结果 | 第25-26页 |
| ·荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP表达结果 | 第26页 |
| ·Western blotting检测TRIB2及相关因子的表达结果 | 第26-28页 |
| PartⅡ miR-511/1297对肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响 | 第28-41页 |
| 1 实验材料 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·常用试剂的配制 | 第28-29页 |
| 2 实验方法 | 第29-35页 |
| ·Real-time PCR检测转染后miRNA表达情况 | 第29-31页 |
| ·MTT检测miR-511和miR-1297对A549细胞增殖的影响 | 第31-32页 |
| ·Hochest 33258检测细胞变化 | 第32-33页 |
| ·Annexin V-FITC/PI双染检测细胞的凋亡率 | 第33-34页 |
| ·裸鼠移植瘤实验检测miR-511/1297对肿瘤生长的影响 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-38页 |
| ·Real-time PCR检测转染后miRNA表达结果 | 第35页 |
| ·MTT检测miRNA转染后细胞增殖抑制率结果 | 第35-36页 |
| ·Hochest 33258检测A549细胞变化 | 第36页 |
| ·Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡 | 第36-37页 |
| ·裸鼠移植瘤生长情况 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 第二部分 miR-596调节MTSS1基因表达在肺腺癌发生及转移中的作用 | 第44-62页 |
| PartⅠ pcDNA-GFP-MTSS1-3’UTR重组载体的构建 | 第44-52页 |
| 1 实验材料 | 第44页 |
| ·菌种及载体 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·常用试剂的配制 | 第44页 |
| ·国际生物学信息途径和计算机分析软件包 | 第44页 |
| 2 实验方法 | 第44-50页 |
| ·目的基因3’UTR序列的引物设计与PCR扩增 | 第44-45页 |
| ·PCR产物与T载体相连及连接产物的克隆与鉴定 | 第45-47页 |
| ·pcDNA-GFP-MTSS1-3’UTR载体构建 | 第47-48页 |
| ·pcDNA-GFP载体与目的片段MTSS1-3’UTR的连接与克隆 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-52页 |
| ·MTSS1-3’UTR的PCR扩增结果 | 第50页 |
| ·T-MTSS1-3’UTR的鉴定结果 | 第50-51页 |
| ·pcDNA-GFP-MTSS1-3’UTR重组载体的鉴定结果 | 第51-52页 |
| PartⅡ miR-596对MTSS1基因及下游信号因子的调控作用 | 第52-56页 |
| 1 实验材料 | 第52页 |
| 2 实验方法 | 第52-54页 |
| ·MTSS1基因相关miRNA的预测 | 第52页 |
| ·MTSS1基因相关miRNA的合成 | 第52页 |
| ·pcDNA-GFP-MTSS1-3’UTR重组载体的中量提取及纯化 | 第52页 |
| ·pcDNA-GFP-MTSS1-3’UTR重组载体与miRNA共转染细胞 | 第52页 |
| ·荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达情况 | 第52页 |
| ·siRNA的合成及筛选 | 第52-53页 |
| ·Western blotting检测MTSS1蛋白及下游信号因子表达的变化 | 第53-54页 |
| 3 实验结果 | 第54-56页 |
| ·荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP表达结果 | 第54页 |
| ·siRNA的筛选结果 | 第54-55页 |
| ·Western blotting检测MTSS1及相关因子的表达结果 | 第55-56页 |
| PartⅢ miR-596对肺腺癌细胞的影响 | 第56-60页 |
| 1 实验材料 | 第56页 |
| 2 实验方法 | 第56-57页 |
| ·MTT检测miR-596对A549细胞增殖的影响 | 第56页 |
| ·Annexin V-FITC/PI双染检测细胞的凋亡率 | 第56页 |
| ·Transwell迁移实验检测细胞迁移情况 | 第56-57页 |
| 3 实验结果 | 第57-58页 |
| ·MTT检测miRNA转染后细胞增殖抑制率结果 | 第57页 |
| ·Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡 | 第57-58页 |
| ·Transwell迁移实验检测细胞迁移结果 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-62页 |
| 小结与后期研究计划 | 第62-63页 |
| 文献综述 | 第63-69页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 研究生期间发表的文章 | 第70页 |
