| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-14页 |
| 前言 | 第14-19页 |
| 第一章 Hela细胞穿透肽的筛选 | 第19-28页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第19-20页 |
| ·菌株和细胞株 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20页 |
| ·方法 | 第20-23页 |
| ·细胞培养 | 第20-21页 |
| ·噬菌体展示环七肽库的滴度测定 | 第21页 |
| ·筛选内化入Hela细胞的噬菌体短肽 | 第21-22页 |
| ·噬菌体原种的扩增制备 | 第22页 |
| ·噬菌体DNA的PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳 | 第22-23页 |
| ·噬菌体克隆的DNA序列测定及氨基酸序列推导 | 第23页 |
| ·结果 | 第23-25页 |
| ·噬菌体展示环七肽库的库容量鉴定 | 第23页 |
| ·噬菌体肽库的筛选及富集效果分析 | 第23-24页 |
| ·噬菌体DNA的PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳剔除空噬菌体 | 第24-25页 |
| ·讨论 | 第25-28页 |
| 第二章 Hela细胞穿透肽库的构建及初步筛选 | 第28-41页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-31页 |
| ·噬菌体库总DNA的提取 | 第29页 |
| ·连接产物的获得 | 第29页 |
| ·电转感受态的制备 | 第29-30页 |
| ·电击转化 | 第30页 |
| ·PCR法剔除穿透肽库中的高丰度序列 | 第30页 |
| ·大规模穿透肽的验证筛选 | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-38页 |
| ·Hela细胞穿透肽库的库容量 | 第31页 |
| ·噬菌体克隆的DNA序列测定及氨基酸序列推导 | 第31-32页 |
| ·噬菌体DNA的PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳 | 第32页 |
| ·对筛选得到的阳性序列进行生物信息学分析 | 第32-38页 |
| ·讨论 | 第38-41页 |
| 第三章 Hela细胞穿透肽内化机制及功能的初步研究 | 第41-59页 |
| ·主要试剂及仪器 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-44页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第42页 |
| ·融合蛋白的原核表达和纯化 | 第42-43页 |
| ·蛋白内化的细胞学实验 | 第43页 |
| ·细胞内化特异性抑制剂的使用 | 第43页 |
| ·内化蛋白量的Western-blot检测 | 第43-44页 |
| ·细胞凋亡的检测 | 第44页 |
| ·统计学处理 | 第44页 |
| ·结果 | 第44-54页 |
| ·重组表达载体pET14b-TDA/DHY-EGFP的构建和蛋白表达纯化 | 第44-45页 |
| ·His-TDA/DHY-EGFP融合蛋白内化研究 | 第45-47页 |
| ·His-TDA/DHY-EGFP融合蛋白内化机制的初步研究 | 第47-50页 |
| ·重组表达载体pET14b-DHY-EGFP-VP3的构建和融合蛋白表达纯化 | 第50-52页 |
| ·His-VP3-EGFP-TAT和His-DHY-EGFP-VP3细胞特异性内化的研究 | 第52-53页 |
| ·His-DHY-EGFP-VP3促Hela细胞凋亡的研究 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-59页 |
| 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 英文缩写词表 | 第64-66页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 统计学证明 | 第68-69页 |
