| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 文献综述 | 第9-15页 |
| 1 水稻条纹病毒研究现状 | 第9-10页 |
| ·水稻条纹叶枯病的症状表现 | 第9页 |
| ·水稻条纹叶枯病的侵染循环 | 第9页 |
| ·病毒分子结构 | 第9-10页 |
| 2 真核翻译起始因子研究进展 | 第10-13页 |
| ·真核翻译起始因子家族功能 | 第10-11页 |
| ·真核翻译起始因子参与蛋白质的翻译过程机制 | 第11-12页 |
| ·真核翻译起始因子参与病毒的侵染循环 | 第12页 |
| ·真核翻译起始因子的抗性研究 | 第12-13页 |
| 3 本研究的目的与意义 | 第13-15页 |
| 引言 | 第15-16页 |
| 材料与方法 | 第16-35页 |
| 1 供试材料 | 第16-17页 |
| ·植物材料 | 第16页 |
| ·菌株与载体 | 第16页 |
| ·试剂 | 第16-17页 |
| ·仪器设备 | 第17页 |
| 2 实验方法 | 第17-35页 |
| ·Trizol 法提提取烟草叶片总 RNA | 第17-18页 |
| ·反转录 | 第18-19页 |
| ·克隆载体的构建 | 第19-22页 |
| ·基因的扩增 | 第19页 |
| ·PCR 产物产物回收 | 第19-20页 |
| ·目的片段与 T 载体连接 | 第20页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第20页 |
| ·转化和筛选 | 第20-21页 |
| ·质粒提取 | 第21-22页 |
| ·序列测定和分析 | 第22页 |
| ·双元表达载体的构建 | 第22-23页 |
| ·克隆载体及双元载体双酶切 | 第22页 |
| ·双酶切后的目的片段与双元载体连接及转化 | 第22-23页 |
| ·酵母双杂交 | 第23-24页 |
| ·酵母感受态细胞制备（LiAc 法） | 第23页 |
| ·质粒转化 | 第23-24页 |
| ·双分子荧光互补 | 第24-25页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·农杆菌浸润烟草组织 | 第24-25页 |
| ·对烟草进行 RSV 摩擦接种 | 第25页 |
| ·利用 RSV 传播介体灰飞虱对水稻进行接毒 | 第25-26页 |
| ·PCR 检测 RSV | 第26页 |
| ·实时荧光定量（Real-time PCR） | 第26-27页 |
| ·烟草及水稻的遗传转化 | 第27-35页 |
| ·转基因超表达载体构建 | 第27页 |
| ·转基因抑制表达载体构建 | 第27页 |
| ·双元载体转化农杆菌（电击法）及农杆菌转化子的鉴定 | 第27页 |
| ·转基因烟草的生成（叶盘法） | 第27-29页 |
| ·转基因水稻植株的获得 | 第29-31页 |
| ·转基因植株阳性鉴定 | 第31-32页 |
| ·Wesrern-blot 检测转基因植株中目标基因蛋白表达量 | 第32-35页 |
| 结果与分析 | 第35-54页 |
| 1 Pip2-1 与 RSV P2 互作验证及亚细胞定位分析 | 第35-39页 |
| ·RSV P2 与 Pip2-1 蛋白互作验证 | 第35-37页 |
| ·互作载体构建 | 第35-36页 |
| ·酵母双杂交验证 RSV P2 与 Pip2-1 蛋白互作 | 第36-37页 |
| ·双分子荧光互补验证 RSV P2 与 Pip2-1 蛋白互作 | 第37页 |
| ·Pip2-1 与 P2 亚细胞定位及共定位情况 | 第37-39页 |
| ·定位载体构建 | 第37-38页 |
| ·Pip2-1、RSV P2 亚细胞定位 | 第38-39页 |
| ·Pip2-1、RSV P2 亚细胞共定位 | 第39页 |
| 2 Pip2-1 在植物体中功能分析 | 第39-47页 |
| ·RSV 侵染后对 Pip2-1 基因表达量的影响 | 第39-42页 |
| ·人工摩擦接种烟草 | 第39页 |
| ·利用介体昆虫对水稻进行接毒 | 第39-40页 |
| ·Real-time PCR 分析 RSV 侵染后的植株中 Pip2-1 表达情况 | 第40-41页 |
| ·分析 RSV P2 对 Pip2-1 基因表达量的影响 | 第41-42页 |
| ·利用 VIGS 技术研究烟草中 Pip2-1 基因功能 | 第42-47页 |
| ·沉默载体构建 | 第42-43页 |
| ·农杆菌侵染 | 第43页 |
| ·Pip2-1 基因沉默表型分析 | 第43-47页 |
| ·Real-time PCR 分析沉默植株中 Pip2-1 基因的表达量 | 第47页 |
| 3 转 Pip2-1 基因植物研究 | 第47-54页 |
| ·转基因载体构建 | 第47-49页 |
| ·超表达载体的构建 | 第48页 |
| ·抑制表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·转基因烟草的获得及阳性鉴定 | 第49-51页 |
| ·转基因水稻的获得及阳性鉴定 | 第51-52页 |
| ·Real-time PCR 及 Wesrern-blot 分析转基因植株中 Pip2-1 基因表达情况 | 第52-54页 |
| ·Real-time PCR 分析转基因水稻和烟草中 Pip2-1 基因表达情况 | 第52-53页 |
| ·Wesrern-blot 分析转基因烟草和水稻中 Pip2-1 基因表达情况 | 第53-54页 |
| 讨论 | 第54-58页 |
| 1 Pip2-1 与 RSV P2 互作验证及亚细胞定位 | 第54-55页 |
| 2 分析 Pip2-1 在植物体中的功能 | 第55-56页 |
| ·分析受 RSV 侵染的烟草及水稻表型差异及 Pip2-1 基因表达量差异 | 第55页 |
| ·通过 VIGS 分析 Pip2-1 在植物体内功能 | 第55-56页 |
| 3 转 Pip2-1 基因植物研究 | 第56-58页 |
| 结论与展望 | 第58-59页 |
| 1 结论 | 第58页 |
| ·Pip2-1 与 RSV P2 具有互作关系，互作主要发生在细胞质与核膜上 | 第58页 |
| ·Pip2-1 基因在植物的生长发育过程中具有不可或缺的作用 | 第58页 |
| ·受 RSV 侵染的植株中 Pip2-1 的 mRNA 表达水平降低 | 第58页 |
| ·成功获得烟草及水稻转基因再生植株 | 第58页 |
| 2 展望 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
