| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第1章 绪论 | 第12-28页 |
| ·极性生长的研究进展 | 第12-16页 |
| ·影响菌丝极性生长的顶体 | 第13-14页 |
| ·丝状真菌极性生长的菌丝顶端模型 | 第14-16页 |
| ·构巢曲霉产孢过程的研究进展 | 第16-20页 |
| ·产孢的介绍 | 第16页 |
| ·产孢的形成过程 | 第16-19页 |
| ·产孢的生理学需求 | 第19-20页 |
| ·钙信号系统主要组分及功能 | 第20-25页 |
| ·钙离子 | 第21-22页 |
| ·四种钙离子通道蛋白 | 第22-23页 |
| ·钙调磷酸酶 | 第23-25页 |
| ·本课题的研究内容、思路及方法 | 第25-28页 |
| ·研究内容 | 第25-26页 |
| ·研究思路与技术路线 | 第26-27页 |
| ·研究方法 | 第27-28页 |
| 第2章 构巢曲霉钙离子通道蛋白CchA、MidA的信息学和系统进化分析 | 第28-37页 |
| ·材料与方法 | 第28-29页 |
| ·数据库、网络服务器(Web Server)和生物软件 | 第28-29页 |
| ·系统进化分析的技术路线和分析方法 | 第29页 |
| ·实验结果 | 第29-36页 |
| ·构巢曲霉CchA蛋白结构和生物信息学分析 | 第29-32页 |
| ·构巢曲霉MidA蛋白结构和生物信息学分析 | 第32-34页 |
| ·构巢曲霉CchA和相关物种同源蛋白的同源性分析 | 第34-35页 |
| ·构巢曲霉MidA和相关物种同源蛋白的同源性分析 | 第35-36页 |
| ·本章小结与讨论 | 第36-37页 |
| 第3章 构巢曲霉CchA、MidA、CnaB敲除菌株的构建及鉴定 | 第37-57页 |
| ·材料与方法 | 第39-46页 |
| ·菌种、质粒及培养条件 | 第39页 |
| ·试剂与仪器 | 第39-40页 |
| ·cchA,midA,cnaB基因敲除的引物设计 | 第40-41页 |
| ·cchA/midA双敲菌株的引物设计 | 第41-42页 |
| ·融合PCR | 第42-43页 |
| ·扩增全长的各组成片段 | 第42-43页 |
| ·融合PCR(Fusion PCR) | 第43页 |
| ·构巢曲霉原生质体的制备及转化 | 第43-44页 |
| ·重组子的初步筛选 | 第44页 |
| ·A.nidulans基因组DNA的提取 | 第44页 |
| ·DIG特异性探针的制备 | 第44-45页 |
| ·A.nidulans转化子的Southern Blotting免疫印迹验证 | 第45-46页 |
| ·实验结果 | 第46-55页 |
| ·△cchA转化子诊断PCR验证结果 | 第46-48页 |
| ·△cchA转化子southern blotting印迹杂交验证结果 | 第48-49页 |
| ·△midA转化子诊断PCR验证结果 | 第49-50页 |
| ·△midA转化子southern blotting印迹杂交验证结果 | 第50-51页 |
| ·△cnaB转化子诊断PCR验证结果 | 第51-53页 |
| ·△cchA/△midA转化子诊断PCR验证结果 | 第53-55页 |
| ·本章小结与讨论 | 第55-57页 |
| 第4章 构巢曲霉中钙离子通道蛋白CchA、MidA在菌丝生长发育中的生物学功能 | 第57-78页 |
| ·CchA、MidA参与构巢曲霉产孢功能的研究 | 第58-66页 |
| ·CchA、MidA在低钙环境下的产孢缺陷 | 第58-61页 |
| ·材料与方法 | 第58-59页 |
| ·菌种及培养条件 | 第58-59页 |
| ·试剂与仪器 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59页 |
| ·实验结果 | 第59-61页 |
| ·CchA、MidA敲除菌株产孢结构显微图 | 第61-64页 |
| ·材料与方法 | 第61-62页 |
| ·菌种及培养条件 | 第61页 |
| ·试剂与仪器 | 第61-62页 |
| ·显微镜观察 | 第62页 |
| ·扫描电镜观察 | 第62页 |
| ·实验结果 | 第62-64页 |
| ·加钙能恢复CchA、MidA突变菌株的产孢缺陷 | 第64-65页 |
| ·材料与方法 | 第64页 |
| ·菌种及培养条件 | 第64页 |
| ·试剂与仪器 | 第64页 |
| ·实验方法 | 第64页 |
| ·实验结果 | 第64-65页 |
| ·渗透逆境能恢复CchA、MidA突变菌株的产孢缺陷 | 第65-66页 |
| ·材料与方法 | 第65-66页 |
| ·菌种及培养条件 | 第65页 |
| ·试剂与仪器 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-66页 |
| ·实验结果 | 第66页 |
| ·CchA、MidA参与构巢曲霉极性生长调节的研究 | 第66-70页 |
| ·材料与方法 | 第67页 |
| ·菌种及培养条件 | 第67页 |
| ·试剂与仪器 | 第67页 |
| ·实验方法 | 第67页 |
| ·实验结果 | 第67-70页 |
| ·CchA,MidA缺失对细胞壁合成抑制剂的抗性及对细胞壁成分影响的研究 | 第70-76页 |
| ·△cchA,△midA突变菌株对细胞壁合成抑制剂的抗性 | 第70-71页 |
| ·材料与方法 | 第70-71页 |
| ·菌种及培养条件 | 第70页 |
| ·试剂与仪器 | 第70页 |
| ·实验方法 | 第70-71页 |
| ·实验结果 | 第71页 |
| ·△cchA,△midA突变菌株细胞壁组分含量的检测 | 第71-76页 |
| ·材料与方法 | 第71-74页 |
| ·菌种及培养条件 | 第71-72页 |
| ·试剂与仪器 | 第72页 |
| ·实验方法 | 第72-74页 |
| ·实验结果 | 第74-76页 |
| ·本章小结和讨论 | 第76-78页 |
| 第5章 构巢曲霉中钙离子通道蛋白CchA、MidA相互作用的in vitro分析 | 第78-82页 |
| ·材料与方法 | 第79-80页 |
| ·质粒载体及菌种 | 第79页 |
| ·试剂与仪器 | 第79页 |
| ·酵母双杂交载体的构建 | 第79页 |
| ·质粒转化入酿酒酵母 | 第79-80页 |
| ·实验结果与讨论 | 第80-82页 |
| 第6章 构巢曲霉中Calcineurin与CchA在生长发育过程中的相互调节作用 | 第82-91页 |
| ·Calcineurin和CchA参与构巢曲霉正常极性生长调节的研究 | 第83-85页 |
| ·材料与方法 | 第83-84页 |
| ·菌种及培养条件 | 第83页 |
| ·试剂与仪器 | 第83-84页 |
| ·菌丝培养及显微镜观察 | 第84页 |
| ·实验结果 | 第84-85页 |
| ·Calcineurin和CchA在渗透逆境下对极性生长调节作用的研究 | 第85-86页 |
| ·材料与方法 | 第85页 |
| ·菌种及培养条件 | 第85页 |
| ·试剂与仪器 | 第85页 |
| ·菌丝培养及显微镜观察 | 第85页 |
| ·显微镜观察结果与讨论 | 第85-86页 |
| ·Calcineurin和CchA在渗透逆境下对菌落影响的研究 | 第86-88页 |
| ·材料与方法 | 第86-87页 |
| ·菌种及培养条件 | 第86-87页 |
| ·试剂与仪器 | 第87页 |
| ·实验方法 | 第87页 |
| ·固体菌落表型结果与讨论 | 第87-88页 |
| ·Calcineurin和CchA缺失菌株对细胞壁和细胞膜抑制剂的敏感性测试 | 第88-90页 |
| ·材料与方法 | 第88-89页 |
| ·菌种及培养条件 | 第88页 |
| ·试剂与仪器 | 第88-89页 |
| ·实验方法 | 第89页 |
| ·实验结果与讨论 | 第89-90页 |
| ·本章小结和讨论 | 第90-91页 |
| 第7章 结论 | 第91-93页 |
| 附录A | 第93-95页 |
| 附录B | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-104页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第104-105页 |
| 致谢 | 第105页 |
