| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩写词表 | 第12-13页 |
| 目录 | 第13-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 第一部分 文献综述 | 第19-51页 |
| 1. 断奶应激对仔猪肠道发育的影响 | 第19-28页 |
| ·自然断奶 | 第19-21页 |
| ·早期断奶 | 第21-22页 |
| ·断奶对仔猪肠道形态发育的影响 | 第22-25页 |
| ·断奶对仔猪肠道消化酶分泌及活性的影响 | 第25-26页 |
| ·断奶对仔猪肠道微生物的影响 | 第26-28页 |
| 2. EGF及其在肠道的稳定性和生物学功能 | 第28-37页 |
| ·EGF | 第28-30页 |
| ·EGF在胃肠道的稳定性 | 第30-31页 |
| ·EGF受体 | 第31-34页 |
| ·EGFR在肠道的分布 | 第34-36页 |
| ·EGF在胃肠道的生物学功能 | 第36-37页 |
| 3 乳酸乳球菌在基因工程中的应用 | 第37-51页 |
| ·乳酸菌 | 第37-38页 |
| ·乳酸乳球菌及其在胃肠道的功能 | 第38-39页 |
| ·乳酸乳球菌表达系统 | 第39-41页 |
| ·NICE表达系统 | 第41-51页 |
| ·Nisin的分子结构 | 第41-43页 |
| ·Nisin的生物合成 | 第43-45页 |
| ·NICE系统的表达调控机制 | 第45-46页 |
| ·NICE系统常用的细菌和质粒 | 第46-48页 |
| ·NICE表达系统的应用 | 第48-51页 |
| 第二部分 研究的目的、意义、内容与技术路线 | 第51-53页 |
| 1 研究目的 | 第51页 |
| 2 研究意义 | 第51页 |
| 3 研究的内容 | 第51-52页 |
| 4 技术路线 | 第52-53页 |
| 第三部分 试验研究 | 第53-111页 |
| 试验一 猪表皮生长因子(pEGF)成熟蛋白编码区的克隆及序列分析 | 第53-67页 |
| 1 引言 | 第53页 |
| 2 材料与方法 | 第53-62页 |
| ·试验材料 | 第53-56页 |
| ·组织样品采集 | 第53页 |
| ·菌株和质粒 | 第53页 |
| ·主要试剂 | 第53-54页 |
| ·主要试剂的配制 | 第54-56页 |
| ·主要仪器设备 | 第56页 |
| ·试验方法 | 第56-62页 |
| ·总RNA提取 | 第56-57页 |
| ·RT-PCR | 第57页 |
| ·PCR扩增 | 第57-59页 |
| ·pMD19-SPUsp45-MPpEGF的构建 | 第59-60页 |
| ·E. coli DH5α感受态细胞的制备 | 第60页 |
| ·E. coli DH5α的转化 | 第60页 |
| ·挑选阳性克隆 | 第60页 |
| ·大肠杆菌的质粒提取 | 第60-61页 |
| ·pMD19-SPUsp45-MPpEGF重组质粒的鉴定 | 第61-62页 |
| 3 试验结果与分析 | 第62-65页 |
| ·肾脏总RNA的提取 | 第62页 |
| ·SPUsp45-MPpEGF融合片段的扩增 | 第62-63页 |
| ·重组质粒pMD19-SPUsp45-MPpEGF的构建 | 第63-65页 |
| ·重组质粒pMD19-SPUsp45-MPpEGF的菌液PCR鉴定 | 第63-64页 |
| ·重组质粒pMD19-SPUsp45-MPpEGF的双酶切鉴定 | 第64页 |
| ·重组质粒pMD19-SPUsp45-MPpEGF的测序鉴定 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-66页 |
| 5 小结 | 第66-67页 |
| 试验二：pEGF在Lactococcus lactis NZ9000中的分泌表达及活性鉴定 | 第67-93页 |
| 1 引言 | 第67页 |
| 2 试验材料和方法 | 第67-79页 |
| ·细菌、细胞及来源 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67-68页 |
| ·主要试剂的配制 | 第68-70页 |
| ·主要仪器设备 | 第70-71页 |
| ·试验方法 | 第71-79页 |
| ·pMD19-SPUsp45-MPpEGF重组质粒的抽提 | 第71页 |
| ·pMD19-SPUsp45-MPpEGF质粒与表达载体pNZ8148双酶切 | 第71页 |
| ·DNA片段的连接 | 第71-72页 |
| ·E.coli MC1061感受态细胞的制备 | 第72页 |
| ·转化E. coli MC1061感受态细胞 | 第72页 |
| ·E. coli MC1061/pNZ8148-SPUsp45-MPpEGF质粒的提取 | 第72页 |
| ·pNZ8148-Usp45-MPpEGF重组质粒的鉴定 | 第72-73页 |
| ·E.coli质粒的提取 | 第73页 |
| ·乳酸乳球菌NZ9000感受态细胞的制备 | 第73-74页 |
| ·电转化L.lactis NZ9000 | 第74页 |
| ·L.lactis NZ9000/pNZ8148-SPUsp45-MPpEGF阳性克隆的筛选及鉴定 | 第74页 |
| ·L.lactis NZ9000/pNZ8148-MPUsp45-MPpEGF的诱导表达 | 第74-75页 |
| ·蛋白表达检测 | 第75-77页 |
| ·pEGF的分泌活性鉴定 | 第77-79页 |
| ·数据分析 | 第79页 |
| 3 试验结果与分析 | 第79-91页 |
| ·pNZ8148-Usp45-pEGF重组质粒的构建 | 第79-81页 |
| ·pNZ8148-Usp45-pEGF重组质粒的构建 | 第79页 |
| ·pMD19-SPUsp45-MPpEGF和pNZ8148双酶切 | 第79-81页 |
| ·E.coli MC1061/pNZ8148-SPUsp45-MpEGF阳性克隆鉴定 | 第81-82页 |
| ·L.lactis NZ9000/pNZ8148-SPUsp45-MpEGF重组菌的鉴定 | 第82-84页 |
| ·L.lactis NZ9000表达的pEGF蛋白检测 | 第84-85页 |
| ·小鼠成纤维细胞的生长特性 | 第85-86页 |
| ·rpEGF活性鉴定 | 第86-91页 |
| ·各处理组对小鼠成纤维细胞CCL-1 L929增殖的影响 | 第86-89页 |
| ·BrdU标记法检测重组表达pEGF对CCL-1 L929细胞增殖的影响 | 第89-91页 |
| 4 讨论 | 第91-92页 |
| 5 小结 | 第92-93页 |
| 试验三：添加pEGF基因重组Lactococcus lactis对断奶仔猪肠道健康的影响 | 第93-111页 |
| 1 引言 | 第93页 |
| 2 材料与方法 | 第93-98页 |
| ·试验动物 | 第93页 |
| ·试验处理 | 第93-95页 |
| ·试验基础饲粮 | 第95-96页 |
| ·圈舍和代谢笼的消毒 | 第96页 |
| ·饲养管理 | 第96页 |
| ·样品的采集和处理 | 第96-97页 |
| ·测定指标及方法 | 第97-98页 |
| ·数据分析 | 第98页 |
| 3 试验结果与分析 | 第98-107页 |
| ·不同处理对仔猪生产性能的影响 | 第98-99页 |
| ·不同处理对仔猪肠黏膜形态的影响 | 第99-104页 |
| ·不同处理对仔猪肠道刷状缘酶活的影响 | 第104-105页 |
| ·不同处理对仔猪肠道菌群的影响 | 第105-107页 |
| 4 讨论 | 第107-109页 |
| 5 小结 | 第109-111页 |
| 第四部分 全文总结与研究展望 | 第111-112页 |
| 1. 总体结论 | 第111页 |
| 2. 本研究的创新点 | 第111页 |
| 3. 有待进一步研究的问题 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-130页 |
| 致谢 | 第130-132页 |
| 攻读学位期间发表的论文和科研参与情况 | 第132页 |
