| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-34页 |
| ·蛋白质折叠研究的意义 | 第16-19页 |
| ·分子伴侣 | 第19-24页 |
| ·分子伴侣的概念 | 第20页 |
| ·分子伴侣家族 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌分子伴侣 | 第21-24页 |
| ·伴侣蛋白(CHAPERONIN) | 第24-29页 |
| ·伴侣蛋白GroEL/GroES的结构 | 第25-26页 |
| ·伴侣蛋白GroEL/GroES的酶学过程 | 第26-27页 |
| ·伴侣蛋白GroEL/GroES底物和折叠原理 | 第27-29页 |
| ·重组人Γ干扰素 | 第29-31页 |
| ·人丫干扰素简介 | 第29页 |
| ·重组人γ干扰素结构 | 第29-31页 |
| ·重组人γ干扰素折叠 | 第31页 |
| ·本文研究思路和内容 | 第31-34页 |
| 第二章 分子伴侣GROEL/GROES与重组人Γ干扰素共表达体系构建 | 第34-44页 |
| ·引言 | 第34-35页 |
| ·材料与仪器 | 第35-36页 |
| ·质粒和菌株 | 第35页 |
| ·培养基 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35-36页 |
| ·实验仪器 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-40页 |
| ·E.coli感受态细胞制备 | 第36-37页 |
| ·质粒构建 | 第37-38页 |
| ·质粒/连接产物转化 | 第38页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第38-39页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第39页 |
| ·共表达体系构建 | 第39页 |
| ·菌种筛选 | 第39-40页 |
| ·菌种保藏 | 第40页 |
| ·分析方法 | 第40页 |
| ·DNA电泳 | 第40页 |
| ·SDS-PAGE蛋白电泳 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-43页 |
| ·质粒构建 | 第40-41页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第41-42页 |
| ·共表达体系构建 | 第42-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第三章 重组人Γ干扰素的可溶表达与纯化 | 第44-52页 |
| ·引言 | 第44页 |
| ·材料与仪器 | 第44-45页 |
| ·菌株 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44-45页 |
| ·缓冲液与试剂 | 第45页 |
| ·实验仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·rhIFN-γ表达及培养条件优化 | 第45页 |
| ·镍柱亲和层析 | 第45-46页 |
| ·分析方法 | 第46页 |
| ·细胞生长测定 | 第46页 |
| ·目标蛋白表达量测定 | 第46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-51页 |
| ·重组E.coli生长曲线 | 第46-47页 |
| ·温度对rhIFN-γ表达量的影响 | 第47-48页 |
| ·IPTG浓度对rhIFN-γ表达量的影响 | 第48-49页 |
| ·伴侣蛋白GroEL/GroES对rhIFN-γ表达量的影响 | 第49-50页 |
| ·镍柱亲和层析纯化rhIFN-γ | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 重组入Γ干扰素结构表征与活性检测 | 第52-62页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·材料与仪器 | 第52-53页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·实验仪器 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-57页 |
| ·圆二色谱检测 | 第53-54页 |
| ·荧光光谱检测 | 第54-55页 |
| ·体积排阻层析 | 第55页 |
| ·DSS化学交联分析 | 第55-56页 |
| ·酶联免疫吸附测定 | 第56-57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-61页 |
| ·圆二色谱分析 | 第57-58页 |
| ·荧光光谱分析 | 第58页 |
| ·体积排阻层析与DSS化学交联分析 | 第58-60页 |
| ·重组人γ干扰素免疫反应性分析 | 第60-61页 |
| ·本章小结 | 第61-62页 |
| 第五章 重组人Γ干扰素折叠途径研究 | 第62-80页 |
| ·引言 | 第62页 |
| ·材料与仪器 | 第62-65页 |
| ·质粒与菌株 | 第62-64页 |
| ·培养基 | 第64页 |
| ·试剂 | 第64页 |
| ·实验仪器 | 第64页 |
| ·分子对接和动力学模拟软件 | 第64-65页 |
| ·实验方法 | 第65-67页 |
| ·酵母双杂交体系构建 | 第65-66页 |
| ·分子伴侣共表达体系构建及蛋白表达 | 第66页 |
| ·蛋白质-蛋白质复合物结构模拟 | 第66页 |
| ·蛋白质-蛋白质复合物分子动力学模拟 | 第66-67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-78页 |
| ·伴侣蛋白与rhIFN-γ相互作用 | 第67-68页 |
| ·rhIFN-γ折叠类型 | 第68-71页 |
| ·rhIFN-γ折叠和组装机理 | 第71-73页 |
| ·分子动力学模拟 | 第73-78页 |
| ·本章小结 | 第78-80页 |
| 第六章 结论与建议 | 第80-84页 |
| ·结论 | 第80-81页 |
| ·建议 | 第81-84页 |
| 参考文献 | 第84-92页 |
| 附录一 分子伴侣详细分类、定位和功能 | 第92-94页 |
| 附录二 符号说明 | 第94-96页 |
| 作者简介 | 第96页 |