| 目录 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 引言 | 第10-15页 |
| 一、帕金森氏病的研究历史概况 | 第10-11页 |
| 二、帕金森氏病的病因和发病机制的研究 | 第11-13页 |
| 三、传统治疗帕金森氏病的方法 | 第13页 |
| 四、细胞治疗与基因治疗组合治疗方法应用于帕金森氏病的优势 | 第13-14页 |
| 五、本课题的研究思路 | 第14-15页 |
| 第一部分 人脐带间充质干细胞的分离培养及鉴定 | 第15-26页 |
| 一、实验材料与方法 | 第16-19页 |
| (一） 实验材料 | 第16-17页 |
| 1、细胞来源 | 第16页 |
| 2、主要试剂及耗材 | 第16页 |
| 3、主要仪器 | 第16-17页 |
| (二） 实验方法 | 第17-19页 |
| 1、人脐带间充质干细胞的原代培养及传代培养 | 第17页 |
| 2、人脐带间充质干细胞的鉴定 | 第17-19页 |
| 二、实验结果与分析 | 第19-24页 |
| 1、人脐带间充质干细胞的形态学特征观察 | 第19-20页 |
| 2、人脐带间充质干细胞生物学特性鉴定 | 第20-24页 |
| 三、讨论 | 第24-26页 |
| 第二部分 携带Lmx1α和NTN基因的重组腺病毒的体外活性检测 | 第26-45页 |
| 一、实验材料与方法 | 第26-35页 |
| (一） 实验材料 | 第26-28页 |
| 1、实验动物 | 第26页 |
| 2、重组腺病毒载体和细胞 | 第26-27页 |
| 3、引物 | 第27页 |
| 4、主要试剂及耗材 | 第27页 |
| 5、主要仪器 | 第27-28页 |
| (二） 实验方法 | 第28-35页 |
| 1、重组腺病毒的扩增 | 第28页 |
| 2、重组腺病毒的滴度测定 | 第28-30页 |
| 3、重组腺病毒的形态学观察 | 第30页 |
| 4、RT-PCR检测Lmx1α和NTN基因在hUC-MSCs中的转录 | 第30-32页 |
| 5、免疫荧光检测Lmx1α和NTN蛋白在hUC-MSCs中的表达 | 第32-33页 |
| 6、免疫印迹(Western Blot)检测hUC-MSCs中Lmx1α的表达和NTN的分泌 | 第33-34页 |
| 7、ELISA检测Ad-NGFpreproNTN感染hUC-MSCs后NTN蛋白分泌的情况 | 第34页 |
| 8、分泌型NTN蛋白体外生物活性测定 | 第34-35页 |
| 二、实验结果与分析 | 第35-42页 |
| 1、重组腺病毒病变的观察 | 第35页 |
| 2、重组腺病毒的滴度测定 | 第35-38页 |
| 3、重组腺病毒在HEK293细胞中的感染情况及其形态学观察 | 第38页 |
| 4、RT-PCR检测Lmx1α和NTN基因在hUC-MSCs中的转录 | 第38-39页 |
| 5、免疫荧光检测Lmx1α和NTN蛋白在hUC-MSCs中的表达 | 第39-40页 |
| 6、免疫印迹(Western Blot)检测hUC-MSCs中Lmx1α的表达和NTN的分泌 | 第40-41页 |
| 7、ELISA检测Ad-NGFpreproNTN感染hUC-MSCs后分泌NTN蛋白的情况 | 第41页 |
| 8、分泌型NTN蛋白体外生物活性测定 | 第41-42页 |
| 三、讨论 | 第42-45页 |
| 第三部分 脐带间充质干细胞向多巴胺能神经元样细胞的诱导分化 | 第45-62页 |
| 一、实验材料与方法 | 第45-53页 |
| (一） 实验材料 | 第45-47页 |
| 1、腺病毒及细胞 | 第45页 |
| 2、引物 | 第45-46页 |
| 3、主要试剂 | 第46-47页 |
| 4、主要仪器 | 第47页 |
| (二） 实验方法 | 第47-53页 |
| 1、重组腺病毒Ad-NGFpreproNTN和Ad-Lmx1α感染hUC-MSCs最佳MOI配比的摸索 | 第47-49页 |
| 2、hUC-MSCs向多巴胺能神经元样细胞诱导分化最适诱导条件的摸索 | 第49-52页 |
| 3、诱导后神经元样细胞的鉴定 | 第52-53页 |
| 二、实验结果与分析 | 第53-59页 |
| 1. 最佳MOI的摸索 | 第53-55页 |
| 2、hUC-MSCs向多巴胺能神经元样细胞分化最适诱导条件的摸索 | 第55-59页 |
| 三、讨论 | 第59-62页 |
| 第四部分 恒河猴单侧帕金森氏病模型的建立及细胞移植和评价 | 第62-83页 |
| 一、实验方法与材料 | 第62-70页 |
| (一） 实验材料 | 第62-63页 |
| 1、实验动物 | 第62-63页 |
| 2、病毒与细胞 | 第63页 |
| 3、主要试剂 | 第63页 |
| 4、主要仪器 | 第63页 |
| (二） 实验方法 | 第63-70页 |
| 1、恒河猴单侧帕金森氏病模型的建立及有效性和时效性的评价 | 第63-65页 |
| 2、细胞移植治疗单侧恒河猴帕金森氏病模型 | 第65-70页 |
| 二、实验结果与分析 | 第70-79页 |
| 1、恒河猴单侧帕金森氏病模型的有效性评价 | 第70-72页 |
| 2、移植细胞的鉴定 | 第72-73页 |
| 3、细胞移植治疗单侧恒河猴帕金森氏病模型的效果评价 | 第73-79页 |
| 三、讨论 | 第79-83页 |
| 小结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-90页 |
| 论文综述 | 第90-106页 |
| 参考文献 | 第97-106页 |
| 致谢 | 第106-108页 |
| 研究生简历 | 第108-110页 |
