| 前言 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-13页 |
| Abstract | 第13-31页 |
| 引言 | 第31-33页 |
| 第一部分 应用二维色谱、质谱联用技术对大肠癌与癌旁组织的差异蛋白质组学研究 | 第33-61页 |
| 1 材料与方法 | 第33-35页 |
| ·材料与试剂 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-35页 |
| ·临床样本取材 | 第34页 |
| ·样品总蛋白提取及蛋白浓度测定 | 第34页 |
| ·样品蛋白水解多肽混合物的制备 | 第34-35页 |
| ·二维色谱与质谱联用分离并鉴定多肽混合物 | 第35页 |
| 2 实验结果 | 第35-57页 |
| ·肿瘤组织总蛋白酶解混合物的二维色谱与质谱联用分析 | 第35-36页 |
| ·癌旁组织总蛋白酶解混合物的二维色谱与质谱联用分析 | 第36页 |
| ·肿瘤与癌旁组织差异蛋白质的质谱分析 | 第36-44页 |
| ·上调蛋白NPM1鉴定质谱数据 | 第44-57页 |
| ·NPM1蛋白质谱鉴定结果 | 第44-45页 |
| ·NPM1蛋白的质谱鉴定：ADKDYHFKVDNDENEHQLSLR序列肽段的鉴定数据 | 第45-48页 |
| ·NPM1蛋白的质谱鉴定：MSVQPTVSLGGFEITPPVVLR 序列肽段的鉴定数据 | 第48-51页 |
| ·NPM1蛋白的质谱鉴定：MTDQEAIQDLWQWR 序列肽段的鉴定数据 | 第51-54页 |
| ·NPM1蛋白的质谱鉴定：VSLGAGAKDELH IVEAEAMNY EGSPIK VTLATLK 序列肽段的鉴定数据 | 第54-57页 |
| 3 小结 | 第57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| 第二部分 NPM1基因克隆、原核载体构建及融合蛋白表达、纯化 | 第61-87页 |
| 技术路线 | 第61-62页 |
| 1 材料和方法 | 第62-75页 |
| ·材料 | 第62-64页 |
| ·主要试剂 | 第62页 |
| ·菌株与载体 | 第62-63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·主要试剂的配制 | 第63-64页 |
| ·实验方法 | 第64-75页 |
| ·引物设计 | 第64-65页 |
| ·PCR尝试扩增目的片段，连入pUC-T载体及测序 | 第65-68页 |
| ·重叠PCR引物的设计 | 第68页 |
| ·重叠PCR扩增目的基因序列 | 第68-70页 |
| ·载体pET28a的线性化 | 第70-72页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第72-73页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第73页 |
| ·序列测定和序列分析 | 第73页 |
| ·目的蛋白的诱导表达小试及表达形式分析 | 第73-74页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第74-75页 |
| 2 结果 | 第75-83页 |
| ·PCR尝试扩增目的片段 | 第75页 |
| ·重叠PCR扩增目的片段 | 第75-77页 |
| ·表达质粒的菌落PCR鉴定 | 第77页 |
| ·序列测定与结果分析 | 第77-80页 |
| ·外源蛋白的诱导表达小试及分析 | 第80-83页 |
| 3 小结 | 第83页 |
| 4 讨论 | 第83-87页 |
| 第三部分 NPM1单克隆抗体制备 | 第87-103页 |
| 技术路线 | 第87-88页 |
| 1 材料和方法 | 第88-94页 |
| ·材料 | 第88-90页 |
| ·主要试剂 | 第88-89页 |
| ·主要仪器 | 第89页 |
| ·实验动物及细胞系 | 第89页 |
| ·主要试剂的配制 | 第89-90页 |
| ·实验方法 | 第90-94页 |
| ·抗原信息 | 第90-91页 |
| ·动物免疫 | 第91页 |
| ·小鼠血清抗体效价测定 | 第91-92页 |
| ·细胞融合 | 第92页 |
| ·阳性克隆筛选 | 第92页 |
| ·阳性细胞单克隆化、建株 | 第92-93页 |
| ·单克隆抗体类与亚类鉴定 | 第93页 |
| ·应用杂交瘤细胞制备腹水并检测效价 | 第93页 |
| ·腹水抗体纯化 | 第93页 |
| ·抗体浓度、纯度及效价检测 | 第93-94页 |
| 2 结果 | 第94-99页 |
| ·免疫实验：血清效价检测结果 | 第94页 |
| ·细胞融合筛选检测结果 | 第94-95页 |
| ·亚克隆及建株 | 第95-96页 |
| ·单克隆抗体类与亚类鉴定结果 | 第96-97页 |
| ·腹水制备及效价检测结果 | 第97页 |
| ·抗体相关检测 | 第97-98页 |
| ·抗体效价检测结果 | 第97页 |
| ·抗体IHC检测结果 | 第97-98页 |
| ·纯化后NPM1单抗的浓度、纯度 | 第98-99页 |
| 3 小结 | 第99-100页 |
| 4 讨论 | 第100-103页 |
| 第四部分 NPM1在结直肠癌中的表达及其与临床病理参数之间的关系 | 第103-123页 |
| 1 材料与方法 | 第103-112页 |
| ·材料 | 第103-104页 |
| ·组织样本来源 | 第103页 |
| ·试剂 | 第103-104页 |
| ·主要仪器 | 第104页 |
| ·试验方法 | 第104-112页 |
| ·临床资料数据库的建立 | 第104-110页 |
| ·检测NPM1表达及其与临床病理参数之间的关系 | 第110-112页 |
| ·免疫组化操作步骤 | 第111页 |
| ·免疫组化结果评估标准和观察计分 | 第111-112页 |
| ·统计学分析 | 第112页 |
| 2. 结果 | 第112-118页 |
| ·NPM1在结直肠癌与癌旁组织中的表达 | 第112-116页 |
| ·NPM1蛋白表达与结直肠癌临床病理特征的关系 | 第116-118页 |
| 3 小结 | 第118-119页 |
| 4 讨论 | 第119-123页 |
| 结论 | 第123-125页 |
| 文献综述 | 第125-146页 |
| 文献综述一 大肠癌蛋白组学的研究进展 | 第125-131页 |
| 摘要 | 第125页 |
| 1 蛋白组学概念 | 第125-126页 |
| 2 诊断研究 | 第126-127页 |
| 3 发病与转移机制研究 | 第127-128页 |
| 4 治疗研究 | 第128-131页 |
| 文献综述二 核仁磷酸蛋白与肿瘤的发生 | 第131-135页 |
| 摘要 | 第131页 |
| 1 NPM 的分子结构 | 第131-132页 |
| 2 NPM 的主要功能 | 第132-133页 |
| 3 NPM 与肿瘤 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-146页 |
| 作者简介 | 第146-147页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第147-148页 |
| 致谢 | 第148页 |
