| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略表 | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-14页 |
| 第一部分 文献综述及选题目的意义 | 第14-28页 |
| 1 前言 | 第14页 |
| 2 病原学 | 第14-19页 |
| ·分类地位 | 第14页 |
| ·病毒粒子结构 | 第14-15页 |
| ·基因组结构 | 第15-16页 |
| ·主要结构蛋白及其生物学功能 | 第16-19页 |
| ·纤突蛋白(S蛋白) | 第16-17页 |
| ·核衣壳蛋白(N蛋白) | 第17-18页 |
| ·膜蛋白(M蛋白) | 第18页 |
| ·小膜蛋白(E蛋白) | 第18页 |
| ·非结构蛋白 | 第18-19页 |
| 3 传染性支气管炎流行病学的研究进展 | 第19-24页 |
| ·分子变异机制 | 第19-20页 |
| ·国外流行情况 | 第20-22页 |
| ·国内流行情况 | 第22-24页 |
| 4 IBV抗体检测方法的研究进展 | 第24-26页 |
| ·血凝抑制试验(HI) | 第24页 |
| ·病毒中和试验(VNT) | 第24-25页 |
| ·琼脂扩散试验(AGP) | 第25页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第25-26页 |
| 5 表位串联技术的研究进展 | 第26页 |
| 6 研究的目的及意义 | 第26-28页 |
| 第二部分 试验研究 | 第28-60页 |
| 第一章 鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白抗原表位的筛选及串联基因的克隆 | 第28-42页 |
| 1 材料 | 第28-30页 |
| ·菌株与载体 | 第28页 |
| ·主要试验仪器 | 第28-29页 |
| ·试验试剂 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第29页 |
| ·常用试剂的配制 | 第29-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-35页 |
| ·IBV S1蛋白生物信息学分析及表位区域的确定 | 第30页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·IBV总RNA的提取 | 第30-31页 |
| ·串联基因F的拼接 | 第31-34页 |
| ·各表位的PCR扩增 | 第32页 |
| ·扩增产物的克隆 | 第32-34页 |
| ·各段表位的连接 | 第34页 |
| ·串联基因F的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-39页 |
| ·IBV S1蛋白生物信息学分析结果 | 第35页 |
| ·IBV S1蛋白抗原表位的确定 | 第35-36页 |
| ·IBV S1蛋白各段表位的PCR扩增结果 | 第36页 |
| ·IBV S1蛋白各段表位双酶切鉴定 | 第36-38页 |
| ·表位串联基因F的鉴定 | 第38页 |
| ·表位串联基因F的结构特征分析 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| ·选择IBV S1蛋白作为研究对象的依据 | 第39页 |
| ·IBV S1蛋白抗原表位的分析及选择 | 第39-40页 |
| ·IBV S1蛋白各抗原表位的连接 | 第40-41页 |
| ·IBV S1蛋白串联基因F的构建策略 | 第41页 |
| ·表位串联基因F的生物信息学特征 | 第41页 |
| 5 小结 | 第41-42页 |
| 第二章 串联基因F的原核表达以及间接ELISA方法的初步建立 | 第42-60页 |
| 1 材料 | 第42-45页 |
| ·试验材料 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·试验试剂 | 第43-45页 |
| ·主要试剂 | 第43页 |
| ·主要试剂的配制 | 第43-45页 |
| 2 方法 | 第45-50页 |
| ·串联基因F的原核表达重组质粒的构建 | 第45-46页 |
| ·重组质粒的抽提与BL21(DE3)感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·重组质粒pMD19-T-F与pET-32a(+)载体的酶切回收 | 第45页 |
| ·连接、转化及鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化 | 第46-48页 |
| ·重组质粒pET32-F的表达 | 第46页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第46页 |
| ·表达条件的优化 | 第46-47页 |
| ·表达产物的初步纯化 | 第47页 |
| ·Western-blot分析 | 第47-48页 |
| ·IBV表位串联蛋白间接ELISA方法的建立 | 第48-50页 |
| ·重组蛋白最佳包被浓度及血清稀释度的确定 | 第48-49页 |
| ·血清最佳作用时间的确定 | 第49页 |
| ·酶标抗体最佳工作浓度的确定 | 第49页 |
| ·酶标抗体作用时间的确定 | 第49页 |
| ·封闭条件的确定 | 第49页 |
| ·底物显色时间的确定 | 第49-50页 |
| ·临界值的确定 | 第50页 |
| ·重复性试验 | 第50页 |
| ·敏感性试验 | 第50页 |
| ·特异性试验 | 第50页 |
| 3 结果 | 第50-58页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第50-53页 |
| ·IPTG最佳诱导浓度的确定 | 第50-51页 |
| ·最佳诱导时间的确定 | 第51-52页 |
| ·表达产物的可溶性分析 | 第52页 |
| ·Western-blot分析 | 第52-53页 |
| ·IBV S1蛋白串联基因间接ELISA方法的建立 | 第53-58页 |
| ·抗原最佳包被浓度及血清稀释度的确定 | 第53-54页 |
| ·血清最佳作用时间的确定 | 第54页 |
| ·酶标抗体最佳工作浓度的确定 | 第54-55页 |
| ·酶标抗体作用时间的确定 | 第55页 |
| ·封闭条件的确定 | 第55页 |
| ·底物显色时间的确定 | 第55-56页 |
| ·临界值的确定 | 第56页 |
| ·重复性试验 | 第56-57页 |
| ·敏感性试验 | 第57-58页 |
| ·特异性试验 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| ·表达载体pET-32a(+)和表达系统的选择 | 第58-59页 |
| ·重组质粒表达条件的优化 | 第59页 |
| ·ELISA检测方法的建立 | 第59-60页 |
| 5 小结 | 第60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
