利用RNAi干扰技术研究大鼠附睾特异性基因Ces7的功能
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-21页 |
| 第一章 附睾的概述 | 第11-17页 |
| 1 附睾的结构和功能 | 第11-13页 |
| 2 附睾与精子成熟 | 第13页 |
| 3 精子形态的改变 | 第13页 |
| 4 精子表面成分的改变 | 第13-14页 |
| 5 附睾基因表达的特点 | 第14页 |
| 6 雄激素及睾丸因子对附睾的基因表达的调控 | 第14-17页 |
| 第二章 羧基酯酶基因的概述 | 第17-21页 |
| 1 羧基酯酶的表达和功能 | 第17页 |
| 2 羧基酯酶的特性 | 第17-19页 |
| 3 羧基酯酶的调控 | 第19页 |
| 4 雄性生殖系统中的羧基酯酶 | 第19-21页 |
| 第二部分 大鼠附睾特异性基因Ces7功能的研究 | 第21-41页 |
| 1 材料与方法 | 第21-28页 |
| ·质粒、菌株及实验动物 | 第21页 |
| ·主要试剂、工具酶 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·试验设计 | 第22页 |
| ·RNAi片段的设计和载体的构建 | 第22-23页 |
| ·回收酶切后的pLenti载体 | 第23页 |
| ·连接 | 第23页 |
| ·转化 | 第23-24页 |
| ·小量抽提质粒 | 第24-25页 |
| ·大量制备质粒 | 第25-26页 |
| ·Western免疫印迹分析 | 第26页 |
| ·Northern Blot分析 | 第26-27页 |
| ·PNGase-F糖苷酶消化 | 第27页 |
| ·Lentivirus的制备 | 第27页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第27-28页 |
| ·细胞培养,转染 | 第28页 |
| 2 siRNA-CES7对精子成熟的影响 | 第28-29页 |
| ·精子获能检测 | 第28-29页 |
| ·精子运动检测 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-37页 |
| ·Ces7表达稳定敲低的SD大鼠模型的建立 | 第29-35页 |
| ·Ces7敲低后对精子运动和获能的影响 | 第35-37页 |
| 4 讨论 | 第37-41页 |
| ·靶基因的筛选 | 第37-38页 |
| ·载体的构建 | 第38页 |
| ·关于注射的剂量 | 第38-39页 |
| ·羧基酯酶的功能 | 第39-41页 |
| 全文结论 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
