| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 引言 | 第8-11页 |
| 1 材料 | 第11-12页 |
| ·质粒和菌株 | 第11页 |
| ·主要试剂 | 第11页 |
| ·主要仪器 | 第11-12页 |
| ·培养基 | 第12页 |
| 2 方法 | 第12-27页 |
| ·D2野生株的药物敏感性测试 | 第12-13页 |
| ·嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因部分上游序列(Fsmp)的测定及其Ⅱ型分泌系统GspF和GspE基因序列分析 | 第13-17页 |
| ·嗜麦芽寡养单胞菌D2株smp基因下游序列(Rsmp)的测定 | 第17-18页 |
| ·同源臂A、tet基因和同源臂B序列的制备 | 第18-21页 |
| ·SOE技术扩增连接"A-tet-B"嵌合DNA序列片段 | 第21-24页 |
| ·重组自杀质粒pDS132-A-tet-B的构建 | 第24-27页 |
| 3 结果 | 第27-32页 |
| ·D2株的药敏试验结果 | 第27-28页 |
| ·D2株smp基因上下游序列的测定及GspF和GspE基因序列的分析 | 第28-29页 |
| ·D2株GspF和GspE基因的PCR扩增 | 第28页 |
| ·重组质粒pMD18T-Rsmp酶切和测序鉴定 | 第28页 |
| ·GspF和GspE基因的分析 | 第28-29页 |
| ·同源臂A、tet和同源臂B片段的制备 | 第29-30页 |
| ·SOE-PCR连接合成"同源臂A-tet-同源臂B"片段 | 第30-31页 |
| ·tet与同源臂B的SOE连接与鉴定 | 第30页 |
| ·同源臂A与tet-B嵌合片段的SOE-PCR连接与鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组自杀质粒pDS132NotI-A-tet-B的构建 | 第31-32页 |
| ·重组自杀质粒pDS132NotI-A-tet-B的鉴定 | 第31页 |
| ·重组自杀质粒pDS132NotI-A-tet-B序列测定 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-37页 |
| ·嗜麦芽寡养单胞菌D2的Ⅱ型分泌系统 | 第32-33页 |
| ·嗜麦芽寡养单胞菌D2株的耐药谱分析 | 第33页 |
| ·同源重组与重组自杀质粒pDS132NotI-A-tet-B的构建 | 第33-35页 |
| ·重叠延伸PCR三段基因片段A、tet、B | 第35-37页 |
| 结论 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-40页 |
| 附录 | 第40-43页 |
| 综述 | 第43-55页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 攻读学位期间成果 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
