| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| ·BBP的理化性质 | 第12页 |
| ·BBP的污染来源 | 第12-13页 |
| ·聚氯乙烯塑料制品 | 第13页 |
| ·室内装饰材料 | 第13页 |
| ·其他 | 第13页 |
| ·BBP的代谢 | 第13-15页 |
| ·BBP在体外的降解 | 第13-14页 |
| ·生物降解 | 第13-14页 |
| ·光催化降解 | 第14页 |
| ·声化学降解 | 第14页 |
| ·BBP在体内的代谢 | 第14-15页 |
| ·BBP的毒理效应 | 第15-18页 |
| ·急性毒性 | 第15-16页 |
| ·神经毒性 | 第16页 |
| ·致癌、致畸、致突变作用 | 第16-17页 |
| ·生殖毒性 | 第17-18页 |
| ·世界各地出台的关于BBP的法规 | 第18-19页 |
| ·欧盟关于限制邻苯二甲酸类使用的规定 | 第18页 |
| ·美国发布的关于邻苯二甲酸酯类限量的法规 | 第18-19页 |
| ·REACH法规关于BBP的规定 | 第19页 |
| ·中国关于PVC塑料用品的规定 | 第19页 |
| ·生物标志物在毒理学研究中的应用 | 第19-21页 |
| ·选择生物标志物的原则 | 第19-20页 |
| ·生物标志物的特点 | 第20页 |
| ·现有的分子生物标志物 | 第20-21页 |
| ·半定量RT-PCR技术在毒理学研究中的应用 | 第21页 |
| ·乙酰胆碱酯酶(ACHE)在农药残留检测中的应用 | 第21-22页 |
| ·本研究的立题依据及意义 | 第22-24页 |
| 第二章 BBP对斑马鱼ACHE、SOD及CAT活性的影响 | 第24-35页 |
| ·前言 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24-25页 |
| ·实验方案设计 | 第25页 |
| ·急性毒性试验 | 第25页 |
| ·BBP毒性试验 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-27页 |
| ·考马斯亮蓝法测定牛血清蛋白的标准曲线 | 第25-26页 |
| ·乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的测定 | 第26页 |
| ·超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定 | 第26-27页 |
| ·过氧化氢酶(CAT)活性的测定 | 第27页 |
| ·统计分析 | 第27页 |
| ·实验结果与分析 | 第27-31页 |
| ·考马斯亮蓝测定牛血清蛋白的标准曲线 | 第27-28页 |
| ·96h急性毒性试验 | 第28-29页 |
| ·BBP对斑马鱼AChE活性的影响 | 第29页 |
| ·BBP对斑马鱼SOD活性的影响 | 第29-30页 |
| ·BBP对斑马鱼CAT活性的影响 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-35页 |
| ·BBP对斑马鱼96h急性毒性试验的影响 | 第31页 |
| ·BBP对斑马鱼乙酰胆碱酯酶(AChE)的影响 | 第31-32页 |
| ·BBP对斑马鱼超氧化物歧化酶(SOD)的影响 | 第32-33页 |
| ·BBP对斑马鱼过氧化氢酶(CAT)的影响 | 第33-35页 |
| 第三章 BBP对斑马鱼ACHE、SOD及CYP1A基因转录的影响 | 第35-43页 |
| ·前言 | 第35页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-38页 |
| ·BBP毒性试验 | 第36页 |
| ·RNA的提取—Trizol法 | 第36页 |
| ·cDNA的合成——两步法RT-PCR | 第36-38页 |
| ·统计分析 | 第38页 |
| ·结果与分析 | 第38-41页 |
| ·BBP对斑马鱼脑组织AChE、SOD、CYP1A基因相对转录量的影响 | 第38-39页 |
| ·BBP对斑马鱼肌肉组织AChE、SOD、CYP1A基因相对转录量的影响 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·BBP对斑马鱼AChE基因转录水平的影响 | 第41页 |
| ·BBP对斑马鱼SOD基因转录水平的影响 | 第41页 |
| ·BBP对斑马鱼CYP1A基因转录水平的影响 | 第41-43页 |
| 第四章 斑马鱼乙酰胆碱酯酶基因的克隆与表达 | 第43-50页 |
| ·前言 | 第43页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·组织、菌株和质粒 | 第43页 |
| ·主要化学试剂及工具酶 | 第43-44页 |
| ·常用缓冲液 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-45页 |
| ·斑马鱼脑组织RNA的提取——Trizol法(同第三章3.2.2) | 第44页 |
| ·斑马鱼脑组织AChE cDNA的合成——两步法RT-PCR | 第44页 |
| ·DNA片段的回收 | 第44页 |
| ·DNA限制性内切酶消化 | 第44-45页 |
| ·DNA片段的连接 | 第45页 |
| ·Ecoli感受态细胞的制备和转化 | 第45页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第45页 |
| ·阳性克隆的筛选与重组质粒的鉴定 | 第45页 |
| ·蛋白质的原核表达 | 第45页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第45页 |
| ·结果与分析 | 第45-49页 |
| ·斑马鱼脑组织RNA的提取 | 第45页 |
| ·RT-PCR扩增斑马鱼脑组织AChE基因 | 第45-46页 |
| ·斑马鱼脑组织AChE基因重组克隆载体pMD-ace的构建及鉴定 | 第46页 |
| ·斑马鱼脑组织AChE基因cDNA的测序结果与分析 | 第46-48页 |
| ·斑马鱼脑组织AChE基因重组表达载体pMAL-ace的构建及鉴定 | 第48页 |
| ·斑马鱼重组表达载体pMAL-ace在E.coli中的表达 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49-50页 |
| 小结 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第58-59页 |
| 衷心感谢以下基金资助 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
