| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·菊粉及菊粉酶 | 第12-13页 |
| ·菊粉酶基因结构 | 第13-16页 |
| ·菊粉酶的表达 | 第16-17页 |
| ·产菊粉酶微生物 | 第17页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第17-19页 |
| ·菊粉酶应用 | 第19-20页 |
| 实验器材 | 第20-21页 |
| 第二章 菊粉酶基因的克隆与载体构建 | 第21-37页 |
| 引言 | 第21页 |
| 材料与方法 | 第21-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·酶和试剂 | 第21页 |
| ·培养基和溶液 | 第21-22页 |
| ·方法 | 第22-29页 |
| ·菌株筛选 | 第22页 |
| ·酵母基因组提取 | 第22页 |
| ·设计引物钓取菊粉酶基因大片段 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增INU1基因ORF片段 | 第23-24页 |
| ·pEASY T3-INU1重组载体的构建 | 第24-25页 |
| ·转化反应 | 第25页 |
| ·重组载体pEASY T3-INU1验证 | 第25-26页 |
| ·重组pEASY T3-INU1质粒酶切验证 | 第26页 |
| ·pPIC9质粒提取 | 第26-27页 |
| ·pPIC9质粒酶切及去磷酸化处理 | 第27页 |
| ·连接反应 | 第27-28页 |
| ·转化反应 | 第28页 |
| ·pPIC9-INU1重组载体验证 | 第28-29页 |
| 结果与讨论 | 第29-37页 |
| ·菌株筛选结果 | 第31页 |
| ·菊粉酶基因INU1的PCR电泳验证 | 第31-32页 |
| ·重组pEASY T3-INU1菌落PCR验证 | 第32页 |
| ·重组pEASY T3-INU1质粒大小验证结果 | 第32-33页 |
| ·酶切验证结果 | 第33-34页 |
| ·载体pPIC9酶切 | 第34页 |
| ·重组pPIC9-INU1菌落PCR验证 | 第34-35页 |
| ·质粒pPIC9-INU1质粒PCR及单酶切验证结果 | 第35-36页 |
| ·测序 | 第36-37页 |
| 第三章 重组菊粉酶基因在毕赤酵母GS115中的表达 | 第37-49页 |
| 引言 | 第37-38页 |
| 材料与方法 | 第38-44页 |
| 菌株与培养基 | 第38-40页 |
| 实验方法 | 第40-44页 |
| ·重组质粒线性化 | 第40页 |
| ·毕赤酵母电转化 | 第40-41页 |
| ·转化子筛选 | 第41-42页 |
| ·酶活性测定 | 第42页 |
| ·蛋白质聚丙烯酰胺电泳 | 第42-43页 |
| ·阳性转化子发酵 | 第43-44页 |
| 实验结果 | 第44-47页 |
| ·菌落PCR验证结果 | 第44页 |
| ·菊粉酶活性测定结果 | 第44-47页 |
| ·SDS-PAGE检测重组蛋白表达 | 第47页 |
| 讨论 | 第47-49页 |
| 总结与展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第57页 |