| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| ·植物源性疫苗研究进展 | 第13-26页 |
| ·植物源性疫苗的概念 | 第13-15页 |
| ·植物源性疫苗宿主系统的选择 | 第15-17页 |
| ·基因转化方法的选择 | 第17-19页 |
| ·植物源性疫苗的表达方式 | 第19-23页 |
| ·提高抗原蛋白在植物中表达水平的策略 | 第23-24页 |
| ·植物源性疫苗的临床试验 | 第24-25页 |
| ·植物源性疫苗存在的问题与发展前景 | 第25-26页 |
| ·兔出血症病毒及其疫苗的研究进展 | 第26-28页 |
| ·兔出血症病毒概况 | 第27页 |
| ·兔出血症病毒疫苗的研究进展 | 第27-28页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第28-29页 |
| ·本研究的选题依据 | 第29-30页 |
| ·本研究的主要内容 | 第30-31页 |
| 第二章 兔出血症病毒衣壳蛋白VP60的原核表达及多克隆抗体制备 | 第31-42页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·载体、菌株及试剂 | 第31页 |
| ·主要培养基及溶液 | 第31-32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| ·引物 | 第33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·VP60原核表达载体的构建 | 第33-35页 |
| ·重组蛋白的诱导表达与可溶性分析 | 第35页 |
| ·目的蛋白表达条件的优化 | 第35页 |
| ·重组蛋白VP60的分离纯化 | 第35-36页 |
| ·VP60多克隆抗体的制备 | 第36页 |
| ·VP60的Western blotting检测 | 第36-37页 |
| ·结果与分析 | 第37-40页 |
| ·重组表达载体的双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的表达及可溶性分析 | 第38页 |
| ·目的蛋白诱导表达条件的优化 | 第38-39页 |
| ·重组VP60的镍离子螯合层析纯化 | 第39-40页 |
| ·VP60的Western blotting检测 | 第40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第三章 ats1A启动子驱动的VP60基因转化烟草的研究 | 第42-58页 |
| ·材料及设备 | 第42-45页 |
| ·材料 | 第42-45页 |
| ·主要仪器 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-50页 |
| ·农杆菌EHA105电击法感受态细胞的制备 | 第45页 |
| ·农杆农杆菌EHA105侵染液的制备 | 第45-46页 |
| ·外植体的准备 | 第46页 |
| ·烟草抗生素筛选压力浓度的确定 | 第46页 |
| ·农杆菌介导烟草的遗传转化 | 第46-47页 |
| ·潮霉素抗性植株的鉴定 | 第47-50页 |
| ·转基因植株的Western blot鉴定 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-56页 |
| ·农杆菌重组子鉴定 | 第50-51页 |
| ·抗生素筛选压力浓度的确定 | 第51-52页 |
| ·农杆菌介导的烟草转化 | 第52-53页 |
| ·潮霉素抗性株的PCR和Southern杂交鉴定 | 第53-55页 |
| ·潮霉素抗性株的RT-PCR 鉴定 | 第55页 |
| ·潮霉素抗性株的Western blot analysis鉴定 | 第55-56页 |
| ·讨论与结论 | 第56-58页 |
| 第四章 百脉根再生体系的建立及VP60基因转化的研究 | 第58-71页 |
| ·材料及设备 | 第58-59页 |
| ·材料 | 第58-59页 |
| ·主要仪器 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-65页 |
| ·外植体的准备 | 第59页 |
| ·百脉根再生体系的建立 | 第59-60页 |
| ·潮霉素抗生素筛选压力浓度的确定 | 第60页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301-vp60的构建 | 第60-64页 |
| ·农杆菌介导的百脉根遗传转化 | 第64页 |
| ·潮霉素抗性植株的鉴定 | 第64-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-69页 |
| ·愈伤组织的诱导和芽的分化 | 第65页 |
| ·再生苗的生根情况 | 第65-66页 |
| ·潮霉素抗生素筛选压力浓度的确定 | 第66-67页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301-vp60的构建 | 第67-68页 |
| ·抗性植株的基因组PCR及RT-PCR检测 | 第68-69页 |
| ·讨论及结论 | 第69-71页 |
| 第五章 苜蓿再生体系的建立 | 第71-79页 |
| ·材料及设备 | 第71-72页 |
| ·材料与试剂 | 第71-72页 |
| ·主要仪器 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-73页 |
| ·苜蓿种子的消毒条件 | 第72页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第72-73页 |
| ·愈伤组织的分化 | 第73页 |
| ·再生芽的生根 | 第73页 |
| ·潮霉素压力浓度的确定 | 第73页 |
| ·结果与分析 | 第73-77页 |
| ·苜蓿种子的消毒条件 | 第73-75页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第75页 |
| ·愈伤组织的分化 | 第75页 |
| ·再生芽的生根 | 第75页 |
| ·潮霉素压力浓度的确定 | 第75-77页 |
| ·结论 | 第77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| 第六章 总结 | 第79-81页 |
| ·本研究的结论 | 第79页 |
| ·本研究创新点 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-88页 |
| 附录 | 第88-90页 |
| 英文缩略词 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 作者简介 | 第92页 |
