| 缩略词表 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 材料与方法 | 第16-25页 |
| 1. 材料及来源 | 第16-18页 |
| ·菌株、质粒和干涉序列 | 第16页 |
| ·细胞培养试剂 | 第16页 |
| ·抗体 | 第16-17页 |
| ·其他主要试剂 | 第17页 |
| ·常用溶液配方 | 第17-18页 |
| ·主要实验仪器 | 第18页 |
| 2. 实验方法 | 第18-25页 |
| ·细胞培养 | 第18页 |
| ·siRNA干涉 | 第18页 |
| ·流式细胞术 | 第18-19页 |
| ·Thymidine - Nocodazole 同步化法 | 第19页 |
| ·Nocodazole 阻滞释放同步化法 | 第19页 |
| ·Western Blot蛋白印记杂交 | 第19-20页 |
| ·定点突变质粒构建 | 第20页 |
| ·免疫沉淀方法一 | 第20页 |
| ·有丝分裂期细胞裂解液的制备 | 第20-21页 |
| ·免疫沉淀方法二 | 第21页 |
| ·GST-CUEDC2 融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第21-22页 |
| ·体外降解体系的建立 | 第22页 |
| ·体外激酶实验 | 第22页 |
| ·昆虫表达CUEDC2 蛋白的纯化 | 第22页 |
| ·染色体核型分析. | 第22-23页 |
| ·免疫组织化学实验 | 第23-24页 |
| ·免疫组化结果的判读及统计分析 | 第24-25页 |
| 结果 | 第25-47页 |
| 1. 体外激酶实验证明CUEDC2 是Cdk1 的底物 | 第25页 |
| 2. 干涉CUEDC2 对有丝分裂期的影响 | 第25-27页 |
| 3. CUEDC2 影响细胞出有丝分裂期 | 第27页 |
| 4. CUEDC2 影响Cyclin B1 和Securin的降解 | 第27-30页 |
| ·干涉CUEDC2 使Cyclin B1 和Securin的降解延迟 | 第27-28页 |
| ·干涉引起的Cyclin B1 降解延迟能够被再表达野生型CUEDC2 逆转 | 第28-29页 |
| ·U20S细胞中验证CUEDC2 对Cyclin B1 和Securin降解的影响 | 第29-30页 |
| 5. 体外降解体系中验证CUEDC2 影响APC/C的泛素E3 酶活性 | 第30-33页 |
| ·体外降解体系的建立 | 第30-31页 |
| ·体外降解体系中主要依赖APC/C发挥泛素E3 酶活性 | 第31-32页 |
| ·体外降解体系中CUEDC2 影响Cyclin B1 和Securin的降解 | 第32页 |
| ·体外降解体系中CUEDC2 影响Geminin的泛素化 | 第32-33页 |
| 6. CUEDC2 不影响前中期Cylcin A的降解 | 第33-34页 |
| 7. CUEDC2 有丝分裂期与APC/C-Cdc20 相互作用 | 第34-37页 |
| ·有丝分裂期CUEDC2 相互作用蛋白的检测（Nocodazole阻滞） | 第34-35页 |
| ·有丝分裂期CUEDC2 相互作用蛋白的检测（Thymidine释放） | 第35页 |
| ·CUEDC2 与APC/C复合物结合的动态过程 | 第35-36页 |
| ·CUEDC2 可以与Cdc20 结合 | 第36页 |
| ·CUEDC2 与Cdc20 的结合依赖于CUEDC2 的磷酸化 | 第36-37页 |
| 8. CUEDC2 影响Mad2 与Cdc20 解离的速率 | 第37-43页 |
| ·干涉CUEDC2 使 Mad2 与Cdc20 的解离速率变慢 | 第37页 |
| ·TMZ体系中验证CUEDC2 对Mad2 与Cdc20 解离的影响 | 第37-38页 |
| ·体外降解体系中CUEDC2 及其突变体对 Mad2 与Cdc20 解离的影响 | 第38-39页 |
| ·体外降解体系中CUEDC2 及其突变体对Geminin泛素化的影响 | 第39-40页 |
| ·免疫缺失实验验证干涉实验结果 | 第40-41页 |
| ·纯化蛋白体外实验排除占位式竞争可能性 | 第41-43页 |
| 9. 分子机制模型图 | 第43页 |
| 10. CUEDC2 的过表达导致细胞系染色体不稳定 | 第43-45页 |
| ·过表达CUEDC2 导致非整倍体的产生 | 第43-45页 |
| ·过表达CUEDC2 导致细胞传代中染色体不稳定 | 第45页 |
| 11. 免疫组化实验检测CUEDC2 在脑癌组织中高表达 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 讨论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 综述 | 第54-69页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 个人简历 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
