| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一篇 文献综述 | 第8-20页 |
| 1 研究目的和意义 | 第8-10页 |
| 2 抗蜱疫苗的可行性 | 第10-12页 |
| 3 功能抗原及其鉴定方法 | 第12-15页 |
| 4 功能抗原的研究进展 | 第15-19页 |
| ·微小牛蜱功能抗原的研究进展 | 第15-17页 |
| ·长角血蜱功能抗原的研究进展 | 第17-18页 |
| ·其它功能抗原的研究进展 | 第18-19页 |
| 5 研究的内容和方法 | 第19-20页 |
| 第二篇 研究报告 | 第20-50页 |
| 1 实验材料 | 第21-23页 |
| ·蜱种、菌种和载体 | 第21页 |
| ·酶和试剂 | 第21页 |
| ·引物设计 | 第21页 |
| ·培养基及其配方 | 第21-22页 |
| ·仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-39页 |
| ·微小牛蜱的解剖 | 第23页 |
| ·微小牛蜱总RNA的提取 | 第23-24页 |
| ·组织的研磨 | 第23页 |
| ·水相分离 | 第23页 |
| ·RNA的沉淀 | 第23-24页 |
| ·RNA的洗涤 | 第24页 |
| ·RNA重溶 | 第24页 |
| ·RNA的检测 | 第24页 |
| ·双链cDNA的合成 | 第24-26页 |
| ·cDNA第一条链的合成 | 第24-25页 |
| ·cDNA第二条链的合成以及末端平滑化 | 第25页 |
| ·双链cDNA的精制 | 第25-26页 |
| ·使用Oligo dT Primer时的cDNA合成图如下所示: | 第26页 |
| ·目的基因Bm91的扩增 | 第26-27页 |
| ·目的基因PCR产物的回收 | 第27-28页 |
| ·目的基因Bm91的亚克隆 | 第28-29页 |
| ·PCR产物与pGEM-T Easy载体的连接 | 第28页 |
| ·感受态细胞JM109的制备 | 第28-29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·重组克隆质粒的提取与鉴定 | 第29-31页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第29-30页 |
| ·重组克隆质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·重组克隆质粒pGEM-T-Bm91的构建图如下: | 第30-31页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第31-33页 |
| ·重组克隆质粒pGEM-T-Bm91与表达载体pPIC9K质粒的单酶切 | 第31-32页 |
| ·目的基因Bm91与表达载体pPIC9K的连接与鉴定 | 第32页 |
| ·重组表达质粒pPIC9K-Bm91的大量制备 | 第32页 |
| ·重组表达载体pPIC9K-Bm91的构建图如下: | 第32-33页 |
| ·重组表达载体pPIC9K-Bm91电转化毕赤酵母GS115 | 第33-34页 |
| ·重组表达质粒pPIC9K-Bm91的线性化 | 第33页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞GS115的制备 | 第33页 |
| ·电转化 | 第33-34页 |
| ·高拷贝重组酵母菌株的筛选 | 第34-35页 |
| ·影印接种法筛选G418抗性高拷贝重组菌株 | 第34页 |
| ·PCR法确认G418抗性高拷贝重组菌株 | 第34-35页 |
| ·重组酵母菌株的诱导表达 | 第35页 |
| ·表达产物的初步纯化和检测 | 第35-39页 |
| ·表达产物的初步纯化 | 第35页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测表达产物 | 第35-38页 |
| ·Western印迹检测表达产物 | 第38-39页 |
| 3 实验结果 | 第39-46页 |
| ·总RNA的检测 | 第39页 |
| ·双链cDNA的检测 | 第39-40页 |
| ·目的基因Bin91的扩增 | 第40页 |
| ·重组克隆质粒pGEM-T-Bm91的酶切、PCR鉴定 | 第40-43页 |
| ·Bin91基因与GenBank中已登录的Bm91基因的核苷酸序列比较 | 第41-42页 |
| ·Bm91基因与GenBank中已登录Bm91基因所编码的氨基酸序列的比较 | 第42-43页 |
| ·重组表达质粒pPIC9K-Bm91的酶切、PCR鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组毕赤酵母菌株的筛选及PCR鉴定 | 第44-45页 |
| ·表达产物的检测及鉴定结果 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE电泳检测表达产物 | 第45-46页 |
| ·Western印记检测表达产物 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-50页 |
| ·目的基因Bm91的克隆 | 第46-47页 |
| ·表达载体pPIC9K的选择 | 第47页 |
| ·表达载体与宿主染色体的整合 | 第47-48页 |
| ·巴斯德毕赤酵母在外源蛋白生产中的优势 | 第48-49页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统的应用前景 | 第49-50页 |
| 参考文献(References) | 第50-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59-62页 |
| 1 所克隆的Bin91基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列 | 第59-60页 |
| ·Bm91基因的核苷酸序列 | 第59页 |
| ·所推导的Bm91基因的氨基酸序列 | 第59-60页 |
| 2 计量单位 | 第60-61页 |
| 3 缩写词英汉对照 | 第61-62页 |
| 个人简介 | 第62-63页 |
| 导师简介 | 第63-64页 |
