| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-29页 |
| ·植物启动子概述 | 第11-22页 |
| ·植物启动子的结构特征 | 第11-12页 |
| ·启动子的种类 | 第12-22页 |
| ·组成型启动子 | 第12-13页 |
| ·组织特异型启动子 | 第13-14页 |
| ·诱导型启动子 | 第14-21页 |
| ·双向(bi-direction)启动子和可变(alternative)启动子 | 第21-22页 |
| ·启动子克隆的方法 | 第22-26页 |
| ·利用启动子探针质粒载体筛选启动子 | 第22-23页 |
| ·利用常规PCR技术克隆启动子 | 第23页 |
| ·TAIL-PCR | 第23-25页 |
| ·利用载体或接头的染色体步移技术(ChromosomeWalking) | 第25-26页 |
| ·ACC合酶基因概述 | 第26-27页 |
| ·ACC合酶由多基因家族编码 | 第26页 |
| ·ACC合酶基因的表达调控 | 第26-27页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第27-29页 |
| 2 ACC合酶基因的5′-RACE及大豆ACC合酶基因启动子的分离 | 第29-43页 |
| ·实验材料 | 第29-30页 |
| ·植物材料 | 第29页 |
| ·仪器与材料 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·引物设计与合成 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-39页 |
| ·大豆基因组DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·大豆ACC合酶基因的扩增 | 第31-32页 |
| ·回收PCR产物 | 第32页 |
| ·大豆ACC合酶基因的5′-cDNA末端快速扩增(5′-RACE) | 第32-37页 |
| ·大豆总RNA的提取 | 第33页 |
| ·RT-PCR | 第33-34页 |
| ·ACC合酶基因的5′-cDNA末端快速扩增(5′-RACE) | 第34-37页 |
| ·大豆ACC合酶基因启动子的克隆 | 第37-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-42页 |
| ·大豆ACC合酶基因的扩增 | 第39页 |
| ·ACC合酶基因的5′-cDNA末端快速扩增(5′-RACE) | 第39-41页 |
| ·大豆总RNA的提取 | 第39-40页 |
| ·RT-PCR | 第40页 |
| ·5′-RACE | 第40-41页 |
| ·大豆ACC合酶基因启动子的克隆 | 第41页 |
| ·大豆ACC合酶基因启动子序列分析 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 3 植物表达载体的构建 | 第43-55页 |
| ·实验材料 | 第43-44页 |
| ·菌株与载体 | 第43页 |
| ·仪器与试剂 | 第43-44页 |
| ·主要仪器 | 第43-44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·引物设计与合成 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-50页 |
| ·载体大片段的准备 | 第45-46页 |
| ·启动子片段的准备 | 第46-49页 |
| ·中间载体的构建 | 第46-48页 |
| ·启动子片段的回收 | 第48-49页 |
| ·载体大片段与启动子片段连接 | 第49-50页 |
| ·连接产物转化DH5a | 第50页 |
| ·筛选阳性克隆并提取质粒 | 第50页 |
| ·重组表达载体质粒转化农杆菌 | 第50页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第50页 |
| ·重组质粒pBIACP转化农杆菌 | 第50页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-54页 |
| ·pBI121大片段的回收 | 第50-51页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第51-52页 |
| ·启动子片段的回收 | 第52-53页 |
| ·重组表达载体转化农杆菌的筛选鉴定 | 第53-54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 4 农杆菌介导的烟草转化 | 第55-63页 |
| ·实验材料与条件 | 第55-57页 |
| ·实验材料 | 第55页 |
| ·仪器与试剂 | 第55-57页 |
| ·主要仪器 | 第55-56页 |
| ·主要试剂 | 第56-57页 |
| ·引物设计与合成 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-59页 |
| ·农杆菌介导的GUS基因瞬时表达的定量分析 | 第57-58页 |
| ·农杆菌介导的烟草的瞬时表达 | 第57页 |
| ·GUS基因瞬时表达定量分析 | 第57-58页 |
| ·农杆菌介导的烟草转化 | 第58-59页 |
| ·GUS组织化学染色 | 第59页 |
| ·GUS基因表达的定量分析 | 第59页 |
| ·结果与分析 | 第59-62页 |
| ·瞬时表达定量分析 | 第59页 |
| ·转基因植株的分析 | 第59-62页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第59-60页 |
| ·转基因烟草GUS基因表达的组织化学分析 | 第60-61页 |
| ·转基因烟草GUS基因表达定量分析 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 5 结论与展望 | 第63-71页 |
| ·结论 | 第63页 |
| ·展望 | 第63-71页 |
| 附录 DNA Marker | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
