| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-12页 |
| 前言 | 第12-22页 |
| 1 犬细小病毒病概述 | 第12-21页 |
| ·病原 | 第12-14页 |
| ·形态特点和理化性质 | 第12页 |
| ·血凝特性 | 第12-13页 |
| ·培养特性 | 第13页 |
| ·CPV的基因组结构 | 第13页 |
| ·CPV编码的蛋白及功能 | 第13-14页 |
| ·致病机理 | 第14-15页 |
| ·犬细小病毒病的流行病学 | 第15-17页 |
| ·CPV的起源和的进化 | 第15-16页 |
| ·新的抗原型CPV(CPV-2c)在猫中的出现 | 第16-17页 |
| ·抗原流行情况 | 第17页 |
| ·临床特征和病理变化 | 第17-18页 |
| ·犬细小病毒诊断方法 | 第18-21页 |
| ·血凝和血凝抑制试验 | 第18页 |
| ·病毒分离 | 第18-19页 |
| ·电镜与免疫电镜 | 第19页 |
| ·免疫色谱法 | 第19页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第19-20页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第20页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第20-21页 |
| 2 研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 实验报告一 CPV VP2基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第22-34页 |
| 1 材料与方法 | 第22-28页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·病毒 | 第22页 |
| ·载体与菌株 | 第22页 |
| ·生化试剂及试剂盒 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-28页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第23页 |
| ·CPV VP2基因的克隆与鉴定 | 第23-26页 |
| ·重组表达质粒的构建与鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第27页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第27-28页 |
| ·表达产物的纯化 | 第28页 |
| ·表达蛋白的Western blot鉴定 | 第28页 |
| 2 结果 | 第28-31页 |
| ·CPV VP2的PCR扩增 | 第28页 |
| ·重组克隆载体酶切鉴定 | 第28-29页 |
| ·vp2核苷酸序列测定结果 | 第29页 |
| ·重组表达载体酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组蛋白VP2的表达与纯化 | 第30页 |
| ·重组蛋白VP2的表达 | 第30页 |
| ·重组蛋白的纯化及Western blot结果 | 第30-31页 |
| 3 讨论 | 第31-34页 |
| ·重组蛋白原核表达 | 第31-33页 |
| ·表达载体的选择 | 第31-32页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第32页 |
| ·包涵体蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| ·目的蛋白的选择及应用 | 第33-34页 |
| 实验报告二 CPV VP2间接ELISA诊断方法的建立 | 第34-46页 |
| 1 材料与方法 | 第34-38页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·试验用标准阳性血清的制备 | 第34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·主要的仪器设备 | 第34-35页 |
| ·间接ELISA操作程序 | 第35页 |
| ·间接ELISA诊断方法的建立 | 第35-37页 |
| ·抗原最适包被量与血清最适稀释度的确定试验 | 第35页 |
| ·酶标抗体最适稀释倍数与最适作用时间确定试验 | 第35-36页 |
| ·工作条件的优化 | 第36页 |
| ·判定标准试验 | 第36-37页 |
| ·方法性能评价 | 第37-38页 |
| ·特异性试验 | 第37页 |
| ·敏感性试验 | 第37页 |
| ·批内重复试验 | 第37页 |
| ·与全病毒ELISA检测试剂盒检测结果比较试验 | 第37-38页 |
| ·间接ELISA诊断方法的应用 | 第38页 |
| 2 结果 | 第38-43页 |
| ·间接ELISA诊断方法的建立 | 第38-41页 |
| ·抗原最适包被量与血清最适稀释度的确定 | 第38-39页 |
| ·酶标抗体最适稀释倍数与最适作用时间确定 | 第39页 |
| ·工作条件的优化 | 第39-40页 |
| ·判定标准 | 第40-41页 |
| ·方法性能评价 | 第41-43页 |
| ·特异性试验 | 第41-42页 |
| ·敏感性试验 | 第42页 |
| ·批内重复试验 | 第42-43页 |
| ·与全病毒ELISA检测试剂盒检测结果比较试验 | 第43页 |
| ·应用建立的诊断方法检测国内部分地区样品的结果 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-46页 |
| ·CPV VP2间接ELISA方法的条件优化 | 第43-44页 |
| ·CPV VP2间接ELISA诊断方法的判定标准及应用 | 第44-46页 |
| 实验报告三 抗CPV VP2单克隆抗体的制备与鉴定 | 第46-54页 |
| 1 材料与方法 | 第46-51页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·细胞、毒株与实验动物 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46-47页 |
| ·方法 | 第47-51页 |
| ·抗原制备及纯化 | 第47页 |
| ·动物免疫 | 第47页 |
| ·SP2/O细胞准备 | 第47页 |
| ·饲养细胞的准备 | 第47-48页 |
| ·免疫脾细胞的制备 | 第48页 |
| ·细胞融合及选择性培养 | 第48页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第48-49页 |
| ·污染和控制 | 第49页 |
| ·细胞的冻存 | 第49页 |
| ·小鼠腹水的制备 | 第49页 |
| ·单克隆抗体特性鉴定 | 第49-51页 |
| 2 结果 | 第51-52页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第51页 |
| ·单克隆抗体的腹水效价的测定 | 第51页 |
| ·单克隆抗体亚类鉴定 | 第51页 |
| ·McAb抗原识别位点分析 | 第51-52页 |
| ·Western blot鉴定 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| ·阳性克隆筛选的要点 | 第52-53页 |
| ·单克隆抗体的应用 | 第53-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录 | 第60-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
