| 摘要 | 第1-14页 |
| ABSTRACT | 第14-21页 |
| 前言 | 第21-24页 |
| 第一部分 肺炎链球菌表面蛋白A，胆碱结合蛋白A 和热休克蛋白CLPP 原核表达载体的构建，表达及纯化 | 第24-54页 |
| 1 实验材料 | 第24-30页 |
| ·主要试剂和引物 | 第24-25页 |
| ·菌种和质粒 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·溶液的制备 | 第26-30页 |
| 2 实验方法 | 第30-42页 |
| ·肺炎链球菌TIGR4 标准株基因组DNA 的获取 | 第30-31页 |
| ·构建原核表达质粒 | 第31-36页 |
| ·原核表达质粒pET32a(+)/PspA, pET32a(+)/CbpA 和 pET32a(+)/ClpP 在大肠杆菌中的表达、鉴定及纯化 | 第36-42页 |
| 3 实验结果 | 第42-48页 |
| ·PspA,CbpA 和ClpP 基因的PCR 扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒的酶切及PCR 鉴定 | 第42-46页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白的制备和纯化 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-54页 |
| 第二部分 重组蛋白的主动免疫保护实验研究 | 第54-64页 |
| 1 实验材料 | 第54-55页 |
| ·实验动物 | 第54页 |
| ·抗原和菌株 | 第54页 |
| ·主要试剂及溶液的配置 | 第54-55页 |
| ·主要仪器 | 第55页 |
| 2 实验方法 | 第55-57页 |
| ·重组蛋白抗原的准备 | 第55页 |
| ·重组蛋白免疫BALB/c 小鼠 | 第55-56页 |
| ·免疫小鼠血清的采集 | 第56页 |
| ·免疫小鼠血清中特异性抗体的检测（ELISA 法） | 第56-57页 |
| ·免疫攻毒保护实验 | 第57页 |
| ·统计学分析 | 第57页 |
| 3 实验结果 | 第57-62页 |
| ·抗原蛋白的质量鉴定 | 第57-58页 |
| ·免疫小鼠血清中特异性抗体的检测结果 | 第58-59页 |
| ·免疫小鼠的免疫攻毒保护实验结果 | 第59-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 第三部分 重组蛋白多克隆抗体的制备及抗体的被动免疫保护实验研究 | 第64-73页 |
| 1 实验材料（见第一，二部分） | 第64页 |
| 2 实验方法 | 第64-66页 |
| ·PspA,CbpA 和ClpP 多克隆抗体血清的制备 | 第64-65页 |
| ·ELISA 鉴定多可隆抗体的滴度（方法同前） | 第65页 |
| ·Western blot 鉴定多克隆抗体与TIGR4 菌体蛋白的反应原性 | 第65-66页 |
| ·免疫攻毒保护实验 | 第66页 |
| ·统计学分析 | 第66页 |
| 3 实验结果 | 第66-70页 |
| ·多克隆抗体血清的制备及滴度分析 | 第66页 |
| ·多克隆抗体血清与TIGR4 型S.pn 菌体蛋白的识别 | 第66-67页 |
| ·多克隆抗体血清的被动保护实验结果 | 第67-70页 |
| 4 讨论 | 第70-73页 |
| 全文总结 | 第73-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文题录 | 第88页 |
